BTN101219 即用型熒光定量RT-PCR試劑盒

產品簡介
即用型熒光定量RT-PCR試劑盒是高品質的核酸擴增(PCR)產品,由北京百奧萊博供應,本產品用于科學研究,我公司的即用型熒光定量RT-PCR試劑盒品質上佳,經過多年的開發生產,已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括即用型熒光定量RT-PCR試劑盒在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:即用型熒光定量RT-PCR試劑盒
英文名稱:Instant Realtime RT-PCR Kit
產品貨號:BTN101219
產品規格:50次
本產品是基于熒光染料檢測的即用型雙酶一管式RT-PCR試劑盒,可以對靶片段進行實時定量RT-PCR分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。產品含有經過優化的緩沖液組分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及熒光染料DNAgreen等所有一管式實時定量RT-PCR所需要的成分,用戶只需加入RNA模板和引物即可進行實時定量RT-PCR反應,具有廣泛的用途。
產品特點:
1.一管式完成qRT-PCR反應,避免樣品交叉污染,尤其適合臨床應用。
2. 即開即用,用戶不需要單獨準備qRT-PCR所需的各種試劑。
3. 主要成分只有兩個(RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix),將加樣步驟減少到zuì低,大降低了加樣誤差,增加了可重復性。
4. 使用范圍廣,適用于從病毒RNA到人RNA的各種RNA模板。
5.高靈敏度,每個RT-PCR體系zuì低可以檢測200拷貝的RNA分子,可擴增的模版RNA的zuì長達2000nt。
試劑盒組成:
成分 | 規格 |
雙酶一管式qRT-PCR Buffer,2× | 750μl |
MMLV-Taq Mix | 100μl |
RNase-free水 | 1ml |
說明書 | 1份 |
儲存條件:低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。
使用方法:
1.在一干凈的無RNase的PCR管中,先加入下列成分(下面只列出樣品管的設置情況,用戶可自己根據需要設置陽性和陰性對照):
成分 | 樣品 |
自備RNA模板(分下面三種情況) | 見下 |
總RNA | 100-500ng |
或poly(A)mRNA | 10-500ng |
或體外轉錄得到的專一RNA | 0.01pg-500ng |
RNA特異性引物一(自備) | 終濃度300nM(注1) |
RNA特異性引物二(自備) | 終濃度300nM |
RNase-free水 | 補到10μL |
雙酶一管式qRT-PCR Buffer(2×) | 15μl |
自備ROX(某些熒光PCR機型需要) | 3μL(注2) |
MMLV-Taq Mix | 2μl |
注1:通常初次使用本試劑時,可用引物濃度300nM進行實驗,根據實驗結果具體情況,在200~800nM范圍內調整引物濃度。引物、待檢樣品的具體加量用戶可以根據實際情況調整,同時增減RNase-free水用量,保證總反應體積不變即可。
注2:如果使用ABI公司的7500,7700和7900三種型號的熒光PCR儀器,則需用自備的ROX進行Ct值校正。對ABI 7700和7900,ROX的zuì佳濃度為1×(即在每30μl反應體系中加3μl 10×ROX)。對ABI 7500,ROX的zuì佳濃度為0.05-0.1×(每30μL反應體系加0.3μL 10×ROX;也可將10×ROX稀釋到1×,然后每個反應體系加入3μL 1×ROX)。ROX會在溶解曲線中產生噪音,因此,如果出現了雜峰,將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項取消打勾,然后重新分析數據。對于iCycler IQ,MJ Opticon,MJ Chromo4,MX3000,MX4000,RotorGene3000,RotorGene 6000和LightCycler 480等型號的熒光PCR儀器,ROX不是必須的,但加入的話也不會影響整個PCR分析。
2. 輕柔混合均勻后放入PCR儀中進行熒光定量RT-PCR。
3. 設定RT-PCR反應條件時,一般將RT的條件設定成42℃ 30分鐘,后接94℃變性5分鐘,然后進入PCR循環(PCR參數將根據自備引物的Tm值和PCR產物長度由用戶自行決定注)、zuì后72℃ 5分鐘。并在退火或延長步驟中記錄熒光信號。本產品中所含的熒光染料在沒結合DNA時,zuì大吸收光譜在471nm,結合DNA時的zuì大吸收光譜在500nm,zuì大發射光譜在530nm。
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