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產品詳情

MTTXXXXX TaqMan microRNA定

  • 產品/服務:MTTXXXXX TaqMan microRNA定
  • 型 號:MTTXXXXX
  • 品 牌:百奧萊博
  • 單 價:面議 
  • 更新日期:2023-05-06
  • 有效期至:長期有效
  • 瀏覽次數:1362
產品簡介

TaqMan microRNA定量PCR試劑盒由專業試劑供應商北京百奧萊博提供,用于科研試驗,我公司專注于核酸擴增(PCR)產品的研發、生產和供應,為您提供的TaqMan microRNA定量PCR試劑盒質量可靠,批間差小,且價格公道,熱切盼望您選購我們的產品。...

產品詳細介紹

特別提示:包括TaqMan microRNA定量PCR試劑盒在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!


產品名稱:TaqMan microRNA定量PCR試劑盒
英文名稱:TaqMan microRNA qPCR Kit
產品貨號:MTTXXXXX
產品規格:20μl×100次

探針法作為microRNA定量研究的金標準,具有高特異性、高靈敏度的。Biorab的TaqMan miRNA定量PCR試劑盒,采用特異性的正向miRNA引物和接頭引物進行PCR擴增,檢測熒光基團采用FAM標記的TaqMan探針。使用該試劑盒可以高特異性、高靈敏度的檢測低至100個細胞的miRNA分子,并可區分相似度高的miRNAs。Biorab的TaqMan miRNA定量PCR試劑盒多達一萬余種,試劑盒編號為MTTxxxxx,每一個mircoRNA分子對應一個檢測試劑盒(包含特異性的TaqMan探針、正向引物、反向引物、定量試劑)。

特別說明: 如您研究的miRNA不在我們的TaqMan microRNA qPCR Kit列表(點擊下載)之中,請登錄www.mirbase.org進行miRNA查詢,并來信告知Accession No.和序列,我們將在2~3周內完成試劑盒的定制。

TaqMan microRNA定量PCR試劑盒原理圖:
TaqMan microRNA定量PCR試劑盒原理圖

產品組成:
組分 100T×20μl
5×TaqMan qPCR Mix 400μl
50×ROX Reference Dye 200μl
20×miRNA TaqMan Assay 100μl

儲存:請置于-20℃,可保存2年;避免反復凍融。

檢測效果和應用實例:

1.高靈敏度(zuì高可到0.1fM級水平)
TaqMan microRNA定量PCR試劑盒的高靈敏度

2.高特異性,有效區分單堿基差異
TaqMan microRNA定量PCR試劑盒的高特異性

3.應用實例
TaqMan microRNA定量PCR試劑盒應用實例

內參基因可選擇使用:
1.TaqMan RNU6B miRNA 定量 PCR 試劑盒(貨號:MTT01501)適用于人、鼠等哺乳動物組織、細胞樣品;
2.TaqMan hsa-miR16 miRNA 定量 PCR 試劑盒(貨號:MTT01511)適用于來源于人、鼠全血樣品。

操作方法:

1.配制反應體系根據機型選擇步驟A或B
步驟A:需要添加 ROX 染料進行反應孔間信號矯正的Real-Time PCR 儀,包括:ABI 7000/7300/7500/7900 等。按照如下組分配制 20μl PCR 反應體系:
5×TaqMan qPCR Mix 4μl
50×ROX Reference Dye 0.4μl
20×miRNA TaqMan Assay 1μl
cDNA 模板 1~2.5μl
ddH2O Up to 20μl

注意:cDNA 模板來自于 TaqMan miRNA 反轉錄產物。
步驟B:無需添加 ROX 染料進行反應孔間信號矯正的Real-Time PCR 儀,包括:LightCycler(Roche); MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad);Line-Gene(杭州博日)等。按照如下組分配制 20μl PCR 反應體系:
5×TaqMan qPCR Mix 4μl
20×miRNA TaqMan Assay 1μl
cDNA 模板 1~2.5μl
ddH2O Up to 20μl

注意:cDNA 模板來自于 TaqMan miRNA 反轉錄產物。

2.進行 Real-Time PCR 反應通常采用兩步法,程序如下:
Stage 1: 95℃ 15分鐘
Stage 2: 95℃ 10s
60 ℃ 60s 40cycles

收集信號采用FAM 染料通道,反應結束后確認 Real-Time PCR的cDNA 樣品和 NTC 陰性對照的擴增曲線。
TaqMan microRNA定量PCR試劑盒擴增曲線

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名稱:雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)
貨號:BTN91202
規格:50次
本產品是經過精心優化的、基于MMLV 逆轉錄酶和Taq DNA聚合酶的雙酶一管式RT-PCR試劑盒,它含有除模版RNA和其專一性引物以外的所有RT-PCR試劑,包括MMLV 逆轉錄酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR緩沖液等,可以在同一反應管內完成RNA→cDNA→PCR反應(RT-PCR反應)。

產品特點:
1.一管式完成RT-PCR反應,避免樣品交叉污染。
2. 即開即用,用戶不需要單獨準備RT-PCR所需的各種試劑。
3. 主要成分只有兩個RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix,將加樣步驟減少到zuì低,大降低了加樣誤差,增加了可重復性。
4. 使用范圍廣,適用于從病毒RNA 到人RNA的各種RNA 模板。
5.高靈敏度,每個RT-PCR 體系zuì低可以檢測200拷貝的RNA分子,可擴增的模版RNA的zuì長達2000nt。
6. 所得RT-PCR產物可以直接用于AT克隆。

試劑盒組成:
成分 規格
雙酶一管式RT-PCR Buffer(2×) 750μl
MMLV-Taq Mix 100μl
RNase-free水 1ml
說明書 1份


儲存條件:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

使用方法:
注意:所有離心管用前zuì好全部短暫離心幾秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一個30μL 體系的RT-PCR 為例,如果體積不同,各成分用量需要適當調節。
1.在一干凈的無RNase的PCR管中,先加入下列成分:
成分 陰性對照 樣品
RNA模板(自備,分下面三種情況) 見下
總RNA 100-500ng
或poly(A)mRNA 10-500ng
或體外轉錄得到的專一RNA 0.01 pg-500ng
RNA特異性引物一(自備) 終濃度300nM 終濃度300nM
RNA特異性引物二(自備) 終濃度300nM 終濃度300nM
探針(僅對Realtime RT-PCR) 終濃度200nM 終濃度200nM
RNase-free水 補到13μL 補到13μL
雙酶一管式RT-PCR Buffer(2×) 15μl 15μl
MMLV-Taq Mix 2μl 2μl

注:通常初次使用本試劑時,可用引物濃度300nM,探針濃度200nM進行實驗,根據實驗結果具體情況,在200~800nM 范圍內調整引物濃度,在50~400nM 范圍內調整探針濃度以達到zuì佳檢測效果。引物、探針、待檢樣品的具體加量用戶可以根據實際情況調整,同時增減DEPC 水用量,保證總反應體積不變即可。
2. 輕柔混合均勻后放入PCR 儀中進行RT-PCR。
3. 設定RT-PCR反應條件時,一般將RT的條件設定成42℃,30 鐘,后接94℃變性5分鐘,然后進入PCR循環(PCR參數將根據自備引物的Tm 值由用戶自行決定注)、zuì后72℃,5分鐘。對Realtime PCR,在復性步驟設置熒光檢測,檢測通道:FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR結束后取5-10μL電泳檢查。

注意事項:
1. 使用已校準的移液器,選用一次性PCR反應管、離心管、tip 頭等進行樣本處理及配液等操作,所有用具應不含DNA酶和RNA酶。
2.引物、探針設計過程中應盡可能避免發夾結構、二聚體等現象的發生,探針的位置盡可能靠近上游引物,PCR 目標片段zuì好小于200bp,盡可能在150bp以內。
3. 實驗樣品盡可能新鮮,提取過程應嚴防RNA酶污染及操作不當導致的RNA 降解。
4. 使用本產品時建議對RT-PCR擴增條件、引物濃度和樣品用量進行調整,選擇zuì適當的引物濃度、樣品濃度和PCR擴增條件。
5. 本產品使用前應在室溫充分融解,并用漩渦震蕩器充分混勻。
6. 統一配液后分裝以減少加樣誤差,每次實驗應設置陰性對照。
7. 禁止標記PCR反應管,避免外源性熒光信號干擾。
8. PCR反應管中不能有氣泡,否則會產生非特異的熒光信號。若有氣泡,可先用手指將氣泡彈破,然后再低速離心消除。
9. 實時熒光PCR 儀器連續進行實驗時,zuì好間隔一小時以上再使用。
10. 實時熒光PCR 儀需經常校正和清潔載樣板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM熒光PCR 儀,應將毛細管放在專門套管中,以便分裝反應體系和加入待檢樣品。前述操作完畢應低速離心數秒再將毛細管垂直緩慢放入樣品架,以免折斷;若發生折斷,應小心取出,用專用小毛刷擦拭干凈后方可進行擴增。
12. 實驗室應嚴格分區,避免PCR產物污染。

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貨號 名稱 規格
BTN70906 NTP溶液(10mM) 0.5mL
BTN131181 EDTA溶液 1mL
YT377 富含GC PCR Buffer 2ml
YT389 dNTP套裝(100mM) 4×50μl
WE0100 PCR Mix(含染料)(滴瓶裝) 5ml
WE0101 Taq DNA Polymerase 500U|2500U|10000U


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聯系人:王欣

電話:18518407031

手機:18518407031(微信同步)

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