MTTXXXXX TaqMan microRNA定

產品簡介
TaqMan microRNA定量PCR試劑盒由專業試劑供應商北京百奧萊博提供,用于科研試驗,我公司專注于核酸擴增(PCR)產品的研發、生產和供應,為您提供的TaqMan microRNA定量PCR試劑盒質量可靠,批間差小,且價格公道,熱切盼望您選購我們的產品。...
產品詳細介紹
特別提示:包括TaqMan microRNA定量PCR試劑盒在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:TaqMan microRNA定量PCR試劑盒
英文名稱:TaqMan microRNA qPCR Kit
產品貨號:MTTXXXXX
產品規格:20μl×100次
探針法作為microRNA定量研究的金標準,具有高特異性、高靈敏度的。Biorab的TaqMan miRNA定量PCR試劑盒,采用特異性的正向miRNA引物和接頭引物進行PCR擴增,檢測熒光基團采用FAM標記的TaqMan探針。使用該試劑盒可以高特異性、高靈敏度的檢測低至100個細胞的miRNA分子,并可區分相似度高的miRNAs。Biorab的TaqMan miRNA定量PCR試劑盒多達一萬余種,試劑盒編號為MTTxxxxx,每一個mircoRNA分子對應一個檢測試劑盒(包含特異性的TaqMan探針、正向引物、反向引物、定量試劑)。
特別說明: 如您研究的miRNA不在我們的TaqMan microRNA qPCR Kit列表(點擊下載)之中,請登錄www.mirba
TaqMan microRNA定量PCR試劑盒原理圖:

產品組成:
組分 | 100T×20μl |
5×TaqMan qPCR Mix | 400μl |
50×ROX Reference Dye | 200μl |
20×miRNA TaqMan Assay | 100μl |
儲存:請置于-20℃,可保存2年;避免反復凍融。
檢測效果和應用實例:
1.高靈敏度(zuì高可到0.1fM級水平)

2.高特異性,有效區分單堿基差異

3.應用實例

內參基因可選擇使用:
1.TaqMan RNU6B miRNA 定量 PCR 試劑盒(貨號:MTT01501)適用于人、鼠等哺乳動物組織、細胞樣品;
2.TaqMan hsa-miR16 miRNA 定量 PCR 試劑盒(貨號:MTT01511)適用于來源于人、鼠全血樣品。
操作方法:
1.配制反應體系根據機型選擇步驟A或B
步驟A:需要添加 ROX 染料進行反應孔間信號矯正的Real-Time PCR 儀,包括:ABI 7000/7300/7500/7900 等。按照如下組分配制 20μl PCR 反應體系:
5×TaqMan qPCR Mix | 4μl |
50×ROX Reference Dye | 0.4μl |
20×miRNA TaqMan Assay | 1μl |
cDNA 模板 | 1~2.5μl |
ddH2O | Up to 20μl |
注意:cDNA 模板來自于 TaqMan miRNA 反轉錄產物。
步驟B:無需添加 ROX 染料進行反應孔間信號矯正的Real-Time PCR 儀,包括:LightCycler(Roche); MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad);Line-Gene(杭州博日)等。按照如下組分配制 20μl PCR 反應體系:
5×TaqMan qPCR Mix | 4μl |
20×miRNA TaqMan Assay | 1μl |
cDNA 模板 | 1~2.5μl |
ddH2O | Up to 20μl |
注意:cDNA 模板來自于 TaqMan miRNA 反轉錄產物。
2.進行 Real-Time PCR 反應通常采用兩步法,程序如下:
Stage 1: | 95℃ | 15分鐘 | |
Stage 2: | 95℃ | 10s | |
60 ℃ | 60s | 40cycles |
收集信號采用FAM 染料通道,反應結束后確認 Real-Time PCR的cDNA 樣品和 NTC 陰性對照的擴增曲線。

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名稱:雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)
貨號:BTN91202
規格:50次
本產品是經過精心優化的、基于MMLV 逆轉錄酶和Taq DNA聚合酶的雙酶一管式RT-PCR試劑盒,它含有除模版RNA和其專一性引物以外的所有RT-PCR試劑,包括MMLV 逆轉錄酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR緩沖液等,可以在同一反應管內完成RNA→cDNA→PCR反應(RT-PCR反應)。
產品特點:
1.一管式完成RT-PCR反應,避免樣品交叉污染。
2. 即開即用,用戶不需要單獨準備RT-PCR所需的各種試劑。
3. 主要成分只有兩個RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix,將加樣步驟減少到zuì低,大降低了加樣誤差,增加了可重復性。
4. 使用范圍廣,適用于從病毒RNA 到人RNA的各種RNA 模板。
5.高靈敏度,每個RT-PCR 體系zuì低可以檢測200拷貝的RNA分子,可擴增的模版RNA的zuì長達2000nt。
6. 所得RT-PCR產物可以直接用于AT克隆。
試劑盒組成:
成分 | 規格 |
雙酶一管式RT-PCR Buffer(2×) | 750μl |
MMLV-Taq Mix | 100μl |
RNase-free水 | 1ml |
說明書 | 1份 |
儲存條件:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
注意:所有離心管用前zuì好全部短暫離心幾秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一個30μL 體系的RT-PCR 為例,如果體積不同,各成分用量需要適當調節。
1.在一干凈的無RNase的PCR管中,先加入下列成分:
成分 | 陰性對照 | 樣品 |
RNA模板(自備,分下面三種情況) | 無 | 見下 |
總RNA | 無 | 100-500ng |
或poly(A)mRNA | 無 | 10-500ng |
或體外轉錄得到的專一RNA | 無 | 0.01 pg-500ng |
RNA特異性引物一(自備) | 終濃度300nM | 終濃度300nM |
RNA特異性引物二(自備) | 終濃度300nM | 終濃度300nM |
探針(僅對Realtime RT-PCR) | 終濃度200nM | 終濃度200nM |
RNase-free水 | 補到13μL | 補到13μL |
雙酶一管式RT-PCR Buffer(2×) | 15μl | 15μl |
MMLV-Taq Mix | 2μl | 2μl |
注:通常初次使用本試劑時,可用引物濃度300nM,探針濃度200nM進行實驗,根據實驗結果具體情況,在200~800nM 范圍內調整引物濃度,在50~400nM 范圍內調整探針濃度以達到zuì佳檢測效果。引物、探針、待檢樣品的具體加量用戶可以根據實際情況調整,同時增減DEPC 水用量,保證總反應體積不變即可。
2. 輕柔混合均勻后放入PCR 儀中進行RT-PCR。
3. 設定RT-PCR反應條件時,一般將RT的條件設定成42℃,30 鐘,后接94℃變性5分鐘,然后進入PCR循環(PCR參數將根據自備引物的Tm 值由用戶自行決定注)、zuì后72℃,5分鐘。對Realtime PCR,在復性步驟設置熒光檢測,檢測通道:FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR結束后取5-10μL電泳檢查。
注意事項:
1. 使用已校準的移液器,選用一次性PCR反應管、離心管、tip 頭等進行樣本處理及配液等操作,所有用具應不含DNA酶和RNA酶。
2.引物、探針設計過程中應盡可能避免發夾結構、二聚體等現象的發生,探針的位置盡可能靠近上游引物,PCR 目標片段zuì好小于200bp,盡可能在150bp以內。
3. 實驗樣品盡可能新鮮,提取過程應嚴防RNA酶污染及操作不當導致的RNA 降解。
4. 使用本產品時建議對RT-PCR擴增條件、引物濃度和樣品用量進行調整,選擇zuì適當的引物濃度、樣品濃度和PCR擴增條件。
5. 本產品使用前應在室溫充分融解,并用漩渦震蕩器充分混勻。
6. 統一配液后分裝以減少加樣誤差,每次實驗應設置陰性對照。
7. 禁止標記PCR反應管,避免外源性熒光信號干擾。
8. PCR反應管中不能有氣泡,否則會產生非特異的熒光信號。若有氣泡,可先用手指將氣泡彈破,然后再低速離心消除。
9. 實時熒光PCR 儀器連續進行實驗時,zuì好間隔一小時以上再使用。
10. 實時熒光PCR 儀需經常校正和清潔載樣板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM熒光PCR 儀,應將毛細管放在專門套管中,以便分裝反應體系和加入待檢樣品。前述操作完畢應低速離心數秒再將毛細管垂直緩慢放入樣品架,以免折斷;若發生折斷,應小心取出,用專用小毛刷擦拭干凈后方可進行擴增。
12. 實驗室應嚴格分區,避免PCR產物污染。

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YT389 | dNTP套裝(100mM) | 4×50μl |
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WE0101 | Taq DNA Polymerase | 500U|2500U|10000U |

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