SYA572 豬偽狂犬單重凝膠PCR檢測(cè)試劑盒

豬偽狂犬單重凝膠PCR檢測(cè)試劑盒的品牌是百奧萊博,是優(yōu)質(zhì)的動(dòng)物疫病PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品,本制品僅用于生物化學(xué)研究方面,我公司的豬偽狂犬單重凝膠PCR檢測(cè)試劑盒品質(zhì)上佳,經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn),已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...
特別提示:包括豬偽狂犬(PRV)單重凝膠PCR檢測(cè)試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:豬偽狂犬(PRV)單重凝膠PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):SYA572
產(chǎn)品規(guī)格:48次/盒
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一、簡(jiǎn)介:
本試劑盒用一對(duì)禽馬立克病病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對(duì)禽馬立克病病毒DNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染動(dòng)物的病原學(xué)診斷。
二、用途:
該試劑盒適合于檢測(cè)腫瘤組織、病變淋巴結(jié)、肝、腎、脾組織等樣本中的禽馬立克病病毒,用于禽馬立克病毒病病毒(MDV)感染的輔助診斷,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
三、試劑盒組成:(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
MDV反應(yīng)液(MDV-qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
MDV陽性對(duì)照(MDVPTC) 1管 50μL/管
四、儲(chǔ)存條件及有效期:
本試劑盒于-20℃以下保存,有效期為6個(gè)月。
五、熒光PCR儀器適用范圍:
ABI系列,Roche系列等熒光定量PCR檢測(cè)儀等。
六、樣品的采集與DNA提取
6.1 樣品的采集
剪取腫瘤組織、病變淋巴結(jié)組織。
6.2 樣品前處理
組織樣品:每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
注:陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高,建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。
七、檢測(cè)步驟
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(MDV-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(MDV-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃ 延伸時(shí)收集熒光信號(hào) 。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX 參比熒光。
八、結(jié)果分析
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?;€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整,以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
(1) 陰性對(duì)照(NTC):不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
(2) 陽性對(duì)照(MDV-PTC):均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
(3) 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則,此次試驗(yàn)視為無效。
8.3 結(jié)果判定
(1) 在試驗(yàn)成立的條件下,Ct值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線,表明MDV核酸陽性。
(2) Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本,表明MDV核酸陰性。
(3) 如果Ct值>35,判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品,先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,則為可疑陽性,否則判為陰性。
(4) 對(duì)于可疑陽性樣品,重新抽提核酸,再次進(jìn)行MDV 檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,判為樣本陽性,表明MDV核酸陽性;否則判為樣本陰性。
九、注意事項(xiàng):
(1) 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
(2) 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌,而且必須不含DNA酶。
(3) PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等),防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行,以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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