ELK1-Luc熒光素酶報(bào)告基因由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要ELK1-Luc熒光素酶報(bào)告基因等報(bào)告基因檢測(cè)產(chǎn)品的客戶，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括ELK1-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：ELK1-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒
英文名稱：ELK1 Luciferase Reporter Plasmid
產(chǎn)品貨號(hào)：SY0124
產(chǎn)品規(guī)格：1μg

ELK1-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（ELK1 luciferase reporter plasmid）是用于檢測(cè)ELK1轉(zhuǎn)錄活性水平為目的的報(bào)告基因。ELk1（ETS domain-containing protein）是一種三元復(fù)合因子，是ETS家族的一類。它在各種生理活動(dòng)中具有重要的作用，包括長期記憶的形成，藥物成癮，老年癡呆癥，唐氏綜合征，乳腺癌，和抑郁癥。

ELK1-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒主要應(yīng)用于MAPK信號(hào)通路的研究、藥物研究以及相關(guān)基因的調(diào)控和功能的研究等。

pGMELK1-Lu是我公司改造后的哺乳動(dòng)物真核表達(dá)載體，在其多克隆位點(diǎn)插入了多個(gè)ELK1結(jié)合位點(diǎn)，可以高靈敏度地檢測(cè)ELK1的激活水平。同時(shí)，對(duì)載體中預(yù)測(cè)出的其它轉(zhuǎn)錄因子以外的結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行了適當(dāng)?shù)耐蛔儯黾恿速|(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合特異性。另外，由于質(zhì)粒體積減小，使得ELK1報(bào)告基因質(zhì)粒更易于轉(zhuǎn)染。

質(zhì)粒圖譜



使用說明
pGMELK1-Lu可以采用常規(guī)轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞。用熒光素酶檢測(cè)試劑盒或雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

注意事項(xiàng)
本質(zhì)粒未經(jīng)我公司允許不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人實(shí)驗(yàn)室以外的任何人或單位。
為了您的健康，實(shí)驗(yàn)操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服和帶一次性手套。

儲(chǔ)存條件：-20℃。

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SY0171 IRF1-GFP報(bào)告基因質(zhì)粒 1μg
SY0199 ERSE-GFP報(bào)告基因質(zhì)粒 1μg

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名稱：雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：YT273
規(guī)格：100次|1000次
本試劑盒是先以螢光素為底物來檢測(cè)螢火蟲螢光素酶，后以腸腔素為底物來檢測(cè)海腎螢光素酶，并且在后續(xù)加入海腎螢光素酶底物時(shí)，同時(shí)加入抑制螢火蟲熒光素酶催化luciferin發(fā)光的物質(zhì)，使后續(xù)檢測(cè)僅僅檢測(cè)到海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。

試劑盒組分：

報(bào)告基因細(xì)胞裂解液	60ml
螢火蟲螢光素酶檢測(cè)試劑	10ml
海腎螢光素酶檢測(cè)緩沖液	10ml
海腎螢光素酶檢測(cè)底物(100×)	100μl

螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會(huì)發(fā)出生物螢光。海腎螢光素酶是一種分子量約為36kD的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的過程中也會(huì)發(fā)出生物螢光。生物螢光可以通過化學(xué)發(fā)光儀或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。本試劑盒的檢測(cè)原理參考下圖。


雙螢光素酶的檢測(cè)原理圖。

通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、地檢測(cè)基因的表達(dá)。通常把感興趣
基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5’啟動(dòng)子區(qū)克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR區(qū)克隆在luciferase的下游等，構(gòu)建成報(bào)告基因(reporter gene)質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞，測(cè)定螢光素酶活性。通過螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。Renilla luciferase相對(duì)更多地被用作轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參，以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。螢火蟲螢光素酶催化luciferin發(fā)光的zuì強(qiáng)發(fā)光波長為560nm。海腎螢光素酶催化coelenterazine發(fā)光的zuì強(qiáng)發(fā)光波長為465nm。

注意事項(xiàng)：
1. 加入海腎螢光素酶檢測(cè)工作液后對(duì)于上一步驟中的螢火蟲螢光素酶的抑制可以達(dá)到99%以上。但總會(huì)殘留微量活性，因此，宜在轉(zhuǎn)染時(shí)把海腎螢光素酶的表達(dá)量控制在其RLU讀數(shù)高于螢火蟲螢光素酶RLU讀數(shù)的10%。海腎螢光素酶的讀數(shù)高于螢火蟲螢光素酶的讀數(shù)是完全可以的，通常不會(huì)有明顯的負(fù)面影響。
2. 為取得zuì佳測(cè)定效果，在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定時(shí)，樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制在相同的時(shí)間內(nèi)，例如30秒內(nèi)；使用具有化學(xué)發(fā)光測(cè)定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時(shí)，宜先把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入螢火蟲螢光素酶檢測(cè)試劑。
3. 由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響，所以測(cè)定時(shí)樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。
4. 為保證螢光素酶檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性，可以采取適當(dāng)分裝后避光保存的方法，以避免反復(fù)凍融和長時(shí)
間暴露于室溫。經(jīng)測(cè)試，反復(fù)凍融三次，對(duì)測(cè)定結(jié)果無明顯影響。
5. 樣品和測(cè)定試劑混合后，必須等待1-2秒，再進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定時(shí)間通常為10秒，根據(jù)情況也可以測(cè)定更長或更短時(shí)間，但是同一批樣品宜使用相同的測(cè)定時(shí)間。
6. 海腎螢光素酶檢測(cè)底物(100×) 配制在無水乙醇中。由于無水乙醇容易揮發(fā)，有時(shí)會(huì)在初次使用時(shí)發(fā)現(xiàn)體積明顯小于100μl的情況，此時(shí)用無水乙醇把體積補(bǔ)足至100μl，并混勻后即可使用。
7. 海腎螢光素酶檢測(cè)工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。隨著保存時(shí)間的延長檢測(cè)效果會(huì)不斷下降，因此不可配制成工作液后長期保存。

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期一年。

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