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特別提示：包括鯉春病毒血癥(SVC)單重熒光PCR檢測試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：鯉春病毒血癥(SVC)單重熒光PCR檢測試劑盒
產品貨號：SYA510
產品規格：48次/盒



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名稱：禽流感病毒(AIV-M)通用型單重熒光PCR檢測試劑盒（定性/定量）
貨號：SYA320
規格：48次/盒|96次/盒
一、簡介：
禽流感病毒實時熒光qRT-PCR檢測試劑是按照美國農業部(USDA)的檢測標準和我國《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法》(GB/T 19438.1-2004)而制備的商業化檢測試劑盒。本試劑盒為中的探針報告基團為6-FAM，淬滅基團為MGB。本方法可定性檢測所有亞型禽流感病毒。

二、用途：
本試劑盒適用于檢測各種禽類喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各種組織樣品、尿囊液及細胞培養液等。可用于禽流感病毒感染的輔助診斷、監測及流行病學調查，其檢測結果僅供參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數量 規格
熒光qRT-PCR反應液(AIV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
無核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對照(NTC) 1 管 50μL/管
陽性對照(AIV-PTC) 1 管 50μL/管

四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-18℃以下保存，有效期為6個月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照標準《高致病性禽流感診斷技術》(GB/T 18936-2003 )和《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法》(GB/T 19438.1-2004 )進行樣品的采集。
6.2 樣品RNA提取
可按常規方法提取，也可采用商品化試劑盒提取病毒RNA。
（1） 取滅菌的1.5 mL Eppendorf離心管，做好標識。
（2） 每管加入600 μL裂解液，分別加入被檢樣本200 μL，再加入200 μLlǜ仿，混勻器上振蕩混勻5 s，于4℃ 12000 r 離心15 min。
（3） 取無RNA酶的1.5 mL Eppendorf離心管，加入-20℃預冷400μL異丙醇，吸取步驟(2)各管中的上清液轉移至相應的管中，避免吸出中間層，顛倒混勻。
（4） 于4℃ 12000 r離心15 min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體；加入600μL 75％預冷乙醇，洗滌。
（5） 于4℃ 12000 r離心10 min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體。
（6） 10000 r離心10 s，用微量加樣器將其吸干，室溫干燥5 min～10 min。
（7） 加入10μL 無核酸降解酶的水，溶解管底的RNA，5000 r離心5 s，冰上保存備用。若需長期保存須放置-70℃ 冰箱。
 注：陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區域加入陽性對照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR反應液(AIV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000r離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(AIV-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 real time RT-PCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
反轉錄(Reverse Transcription) 1循環 45℃ for 5 min
預變性 1循環 94℃ for 30 sec
PCR擴增(PCR amplification ) 40循環 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃延伸時收集熒光信號 。報告基團：設置為FAM。

八、結果分析：
8.1 結果分析條件設定
直接讀取檢測結果。基線和閾值設定原則根據儀器噪聲情況進行調整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
（1） 陰性對照(NTC)：不應產生任何的擴增曲線。
（2） 陽性對照(AIV -PTC)：均產生擴增曲線。
（3） 以上條件應同時滿足 ，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結果判定
（1） 在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明AIV核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明AIV核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行AIV qRT-PCR檢測。如果重復擴增曲線為對數擴增曲線，判為樣本陽性，表明AIV核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
（1） 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含RNA酶。
（3） PCR操作應嚴格按照要求分區(試劑配制區、標本處理區、PCR擴增區等)，防止實驗室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區的超凈工作臺進行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛生部《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。


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