MEF3-Luc熒光素酶報告基因的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的報告基因檢測產(chǎn)品，本制品用于生化實驗研究等領(lǐng)域，MEF3-Luc熒光素酶報告基因是我司眾多優(yōu)質(zhì)報告基因檢測之一，質(zhì)量堪比同類進口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括MEF3-Luc熒光素酶報告基因質(zhì)粒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：MEF3-Luc熒光素酶報告基因質(zhì)粒
英文名稱：MEF3 Luciferase Reporter Plasmid
產(chǎn)品貨號：SY0133
產(chǎn)品規(guī)格：1μg

MEF3-Luc熒光素酶報告基因質(zhì)粒（MEF3 luciferase reporter plasmid）是用于檢測MEF3(myocyte enhancer factor 3)轉(zhuǎn)錄活性水平為目的的報告基因。

MEF3-Luc熒光素酶報告基因質(zhì)粒主要應(yīng)用于Myocyte Enhancer Factor 3信號通路、藥物研究、相關(guān)基因的調(diào)控和功能的研究。

pGMMEF3-Lu是我公司改造后的哺乳動物真核表達載體，在其多克隆位點插入了多個MEF3結(jié)合位點，可以高靈敏度地檢測MEF3的激活水平。同時，對載體中預(yù)測出的其它轉(zhuǎn)錄因子以外的結(jié)合位點進行了適當(dāng)?shù)耐蛔儯黾恿速|(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合特異性。另外，由于質(zhì)粒體積減小，使得MEF3報告基因質(zhì)粒更易于轉(zhuǎn)染。

質(zhì)粒圖譜



使用說明
pGMMEF3-Lu可以采用常規(guī)轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞。用熒光素酶檢測試劑盒或雙熒光素酶檢測試劑盒進行檢測。

注意事項
本質(zhì)粒未經(jīng)我公司允許不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人實驗室以外的任何人或單位。
為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。

儲存條件：-20℃。

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名稱：雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒
貨號：YT273
規(guī)格：100次|1000次
本試劑盒是先以螢光素為底物來檢測螢火蟲螢光素酶，后以腸腔素為底物來檢測海腎螢光素酶，并且在后續(xù)加入海腎螢光素酶底物時，同時加入抑制螢火蟲熒光素酶催化luciferin發(fā)光的物質(zhì)，使后續(xù)檢測僅僅檢測到海腎螢光素酶的活性，實現(xiàn)雙螢光素酶報告基因檢測。

試劑盒組分：

報告基因細胞裂解液	60ml
螢火蟲螢光素酶檢測試劑	10ml
海腎螢光素酶檢測緩沖液	10ml
海腎螢光素酶檢測底物(100×)	100μl

螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物螢光。海腎螢光素酶是一種分子量約為36kD的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的過程中也會發(fā)出生物螢光。生物螢光可以通過化學(xué)發(fā)光儀或液閃測定儀進行測定。本試劑盒的檢測原理參考下圖。


雙螢光素酶的檢測原理圖。

通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、地檢測基因的表達。通常把感興趣
基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5’啟動子區(qū)克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR區(qū)克隆在luciferase的下游等，構(gòu)建成報告基因(reporter gene)質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細胞，用適當(dāng)藥物等處理細胞后裂解細胞，測定螢光素酶活性。通過螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。Renilla luciferase相對更多地被用作轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參，以消除細胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。螢火蟲螢光素酶催化luciferin發(fā)光的zuì強發(fā)光波長為560nm。海腎螢光素酶催化coelenterazine發(fā)光的zuì強發(fā)光波長為465nm。

注意事項：
1. 加入海腎螢光素酶檢測工作液后對于上一步驟中的螢火蟲螢光素酶的抑制可以達到99%以上。但總會殘留微量活性，因此，宜在轉(zhuǎn)染時把海腎螢光素酶的表達量控制在其RLU讀數(shù)高于螢火蟲螢光素酶RLU讀數(shù)的10%。海腎螢光素酶的讀數(shù)高于螢火蟲螢光素酶的讀數(shù)是完全可以的，通常不會有明顯的負面影響。
2. 為取得zuì佳測定效果，在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測定時，樣品和測定試劑混合后到測定前的時間應(yīng)盡量控制在相同的時間內(nèi)，例如30秒內(nèi)；使用具有化學(xué)發(fā)光測定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時，宜先把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入螢火蟲螢光素酶檢測試劑。
3. 由于溫度對酶反應(yīng)有影響，所以測定時樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。
4. 為保證螢光素酶檢測試劑的穩(wěn)定性，可以采取適當(dāng)分裝后避光保存的方法，以避免反復(fù)凍融和長時
間暴露于室溫。經(jīng)測試，反復(fù)凍融三次，對測定結(jié)果無明顯影響。
5. 樣品和測定試劑混合后，必須等待1-2秒，再進行測定。測定時間通常為10秒，根據(jù)情況也可以測定更長或更短時間，但是同一批樣品宜使用相同的測定時間。
6. 海腎螢光素酶檢測底物(100×) 配制在無水乙醇中。由于無水乙醇容易揮發(fā)，有時會在初次使用時發(fā)現(xiàn)體積明顯小于100μl的情況，此時用無水乙醇把體積補足至100μl，并混勻后即可使用。
7. 海腎螢光素酶檢測工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。隨著保存時間的延長檢測效果會不斷下降，因此不可配制成工作液后長期保存。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

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