北京百奧萊博供應的鼠疫耶爾森菌用于科研目的，我公司的鼠疫耶爾森菌品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)單重熒光PCR檢測試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)單重熒光PCR檢測試劑盒
產品貨號：SYA114
產品規格：48次/盒

一、簡介：
本試劑盒用一對鼠疫桿菌特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光PCR技術對鼠疫桿菌進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

二、用途：
本試劑盒適用于檢測全血等樣品中的鼠疫桿菌(YP)，用于鼠疫桿菌(YP)的輔助診斷，其檢測結果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數量 規格
YP反應液(YP-qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5ml/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
YP陽性對照(YP-PTC) 1管 50μL/管

四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
取抗凝血下層血細胞50μL，加入100μL雙蒸水吹勻。
6.2 RNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽液體，按以下說明進行DNA核酸的提取。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業化產品，并按照相應試劑盒說明進行操作。
對上述處理好的樣本加入50μL核酸提取液，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉移至新的1.5ml EP管，-20℃保存。
 注：陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區域加入陽性對照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(YP-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1μL N×1μL
總量 15 μL N×15μL
向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(YP-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qRT-PCR反應條件
將各反應管放入實時熒光PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM，淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

八、結果分析：
8.1 結果分析條件設定
直接讀取檢測結果。基線和閾值設定原則根據儀器噪聲情況進行調整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
（1） 陰性對照(NTC)：不應產生任何的擴增曲線。
（2） 陽性對照(YP-PTC)：均產生擴增曲線。
（3） 以上條件應同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結果判定
（1） 在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明鼠疫桿菌核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明鼠疫桿菌核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行鼠疫桿菌qPCR檢測。如果重復擴增曲線為對數擴增曲線，判為樣本陽性，表明鼠疫桿菌核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
（1） 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
（3） PCR操作應嚴格按照要求分區(試劑配制區、標本處理區、PCR擴增區等)，防止實驗室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區的超凈工作臺進行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛生部《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。


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