QN4109 葡聚糖凝膠G-10

產(chǎn)品簡介
葡聚糖凝膠G-10的品牌是百奧萊博,是優(yōu)質(zhì)的分離試劑類產(chǎn)品,本制品僅用于生物化學(xué)研究方面,本產(chǎn)品質(zhì)量好,且具價(jià)格,深為用戶稱道,了解更多葡聚糖凝膠G-10等分離試劑類產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示:包括葡聚糖凝膠G-10在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:葡聚糖凝膠G-10
英文名稱:Sephadex G-10 medium
產(chǎn)品貨號:QN4109
產(chǎn)品規(guī)格:25g
葡聚糖凝膠G-10分離范圍<700。
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度,因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。
葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細(xì)級的葡聚糖凝膠是用于需要高分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程,可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外,粗級也可用于批量工藝。
葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學(xué)降解)。它在水、鹽溶液、有機(jī)溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的,在強(qiáng)酸中凝膠骨架的糖昔鍵被水解。長期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應(yīng)避免使用。
葡聚糖疑膠并不熔融,可以在濕態(tài)、中性PH進(jìn)行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機(jī)械強(qiáng)度取決于交聯(lián)度。
使用方法:
1.葡聚糖凝膠預(yù)處理:
在室溫下,將葡聚糖凝膠干粉浸泡于蒸餾水中至少24小時(shí),并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,或者用蒸餾水煮沸至少1小時(shí)直至充分溶脹,凝膠體積不再變化。
注:在溶脹前,加入蒸餾水?dāng)嚢韬笫蛊渥匀怀两担两岛笕羯蠈尤芤褐衅〉哪z碎片顆粒較多,需要重復(fù)多次漂洗將其除去,防止層析時(shí)阻塞凝膠柱,影響流速。
2.裝柱:
將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層; 裝柱要均勻,可在凝膠耐受的操作壓下裝柱,裝好的凝膠柱可以檢測柱效,檢測過濾柱裝填是否合格。
凝膠層析分離度取決于柱高,為分離不同組分,凝膠柱床必須有適宜的高度:分級分離時(shí),一般需要100cm左右長的層析柱,柱高與直徑之比為20~100:1,柱高過高時(shí),凝膠擠壓變形阻塞會(huì)引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免;分組分離(例如脫鹽)時(shí)用短柱,柱高控制在40~50cm以下,柱高與直徑的比約為5~10:1。
3.平衡:
上樣前用平衡液平衡層析柱至少3~5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
4.上樣:
分級分離時(shí)上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1~2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積。
樣品溶液如有雜質(zhì)或沉淀應(yīng)過濾或離心除去,樣品的粘度不能過高,否則影響分離效果。
5.洗脫方法:
可以用無鹽水,也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫;在上柱緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以完全分離純化;
6.在位清洗(CIP):
凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向清洗四個(gè)柱體積,再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。
7.保存:
凝膠柱暫時(shí)不用,可將其回收,一般方法是將凝膠用水沖洗干凈濾干,可加入0.02%疊氮化鈉防腐或用20%乙醇浸泡,以控制微生物生長。
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環(huán)氧活化-瓊脂糖凝膠6B以6%瓊脂糖凝膠為基質(zhì),采用環(huán)氧活化的方法激活瓊脂糖上的羥基,活化后即可直接用于各種配基的偶聯(lián)。可用于各種含有氨基、巰基或羥基的親和配基(蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸或糖等)的偶聯(lián)。具有使用方便、偶聯(lián)條件溫和、偶聯(lián)效率高和應(yīng)用范圍廣的特點(diǎn)。
基質(zhì):6%高度交聯(lián)瓊脂糖凝膠
功能基團(tuán):epoxy
配基密度:20~40μM drained matrix
平均粒徑:90μm
zuì大流速:300cm/h
偶聯(lián)條件:pH8~10,溫度4~45℃,時(shí)間1~16小時(shí),可在水相和有機(jī)相中偶聯(lián)
用途:親和層析介質(zhì)
性狀:白色膠體;
儲(chǔ)存溫度:4~8℃
使用說明:
1.溶液的準(zhǔn)備
偶聯(lián)液:0.1M Na2CO3, pH8.5~10.0
封閉液:1M 乙醇胺,pH8.0
清洗液1:0.1M 乙酸-乙酸鈉,0.5M NaCl,pH4.0
清洗液2:0.1M Tris-HCl,0.5M NaCl,pH8.0
保護(hù)液:含20%乙醇的1XPBS
2.樣品準(zhǔn)備
樣品用偶聯(lián)液溶解,濃度約5~10mg/ml。
3.樣品偶聯(lián)
① 取適量的環(huán)氧活化-瓊脂糖凝膠6B,去除保護(hù)液,離子水清洗三次,用偶聯(lián)液清洗一次。
② 將溶解好的樣品中溶解后轉(zhuǎn)入清洗好的環(huán)氧活化-瓊脂糖凝膠6B中,填料:樣品溶液體積比約為1:1。
③ 25-40℃搖床中振蕩混合反應(yīng)24h。注:確保樹脂懸浮起來,否則會(huì)大大影響偶聯(lián)效率。
④ 反應(yīng)完后收集偶聯(lián)樣品,以便檢測偶聯(lián)效率。偶聯(lián)液清洗一遍。
⑤ 加入等體積的封閉液,37℃振蕩混合反應(yīng)1h。
⑥ 將上述反應(yīng)體系取出,流干其中的溶液,用3 倍柱體積的去離子水清洗樹脂,清洗液1、去離子水、清洗液2和去離子水重復(fù)沖洗2次,然后保存在等體積的保護(hù)液中,于2℃~8℃保存。
注意事項(xiàng):
1.不同配基的偶聯(lián)方法與上面類似,但是反應(yīng)的條件例如:配基加入量,反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)溫度應(yīng)根據(jù)配基的不同進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整;
2.可用碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液做為偶聯(lián)緩沖液,但不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸的緩沖液。
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