堿性磷酸酶染色試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品僅用于生物化學研究方面，我公司的堿性磷酸酶染色試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括堿性磷酸酶染色試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：堿性磷酸酶染色試劑盒
英文名稱：Alkaline Phosphatase Stain Kit
產品貨號：SY0578
產品規格：50T|100T

堿性磷酸酶，即Alkaline Phosphatase，縮寫AP，該酶在大多數細胞類型中均有表達，但是在胚胎干細胞（ES）和誘導多能干細胞（iPS）內的表達水平明顯升高；經固定的ES和iPS被堿性磷酸酶試劑盒染色后，未分化的細胞可呈現藍/紫色，分化的細胞呈現無色。百奧萊博提供的該試劑盒特異性強、靈敏度高，可對ES和iPS細胞分化狀況進行較好的評估。

產品組份：
染色液A————1.25ml×2
染色液B————0.65ml
染色液C————25ml

注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）使用前請自備：PBS 緩沖液、PBST或TBST、4%多聚甲醛。
3）本試劑盒染色液A、B瓶口若出現少量液體凝固屬正?，F象，融化混勻后正常使用即可。

儲存條件：4℃，有效期6個月。

根據您的關注的堿性磷酸酶染色試劑盒，您可能還對以下產品有需求：



名稱：生物素標記dUTP溶液(Biotin-11-dUTP)
貨號：BTN100920
規格：50μL
本產品是濃度為1mM的Biotin-11-dUTP。分子式：C28H41N6O17P3SNa3，分子量：927.6。分子結構式圖如下：

Biotin-11-dUTP常用于PCR、缺口平移、cDNA合成、隨機引物標記和引物延伸等方法標記DNA。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期兩年。

名稱：生物素標記UTP溶液(Biotin-16-UTP )
貨號：BTN151203
規格：25μL

名稱：隨機引物法DNA探針標記試劑盒
貨號：BTN90603A
規格：5次
本試劑盒是基于Feinberg和Vogelstein發明的隨機引物標記法而開發出來的即用型DNA探針標記試劑盒，標記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機引物與單鏈DNA結合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探針并摻入標記的核苷酸三步組成，可用下面的示意圖表示：

本產品對Feinberg和Vogelstein經典方法進行了改良。

產品特點：
1. 提供的標記反應液整合了除酶和模板外的所有成分，簡化了反應加樣步驟，提高了標記反應的可重復性。
2. 使用無外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已標記DNA探針不會被酶降解。
3.快速，zuì快1小時即可完成標記反應。
4. 得到的DNA探針比活性高(如果是同位素，可以達到109cpm/μg DNA)，檢測靈敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各種形狀(線狀和環狀)的、也可以是單鏈或雙鏈的，長度在100bp以上均可。
6. 得到的探針長度在200-400nt之間，可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點印跡雜交等。
7. 提供三種標記選擇，其中BTN90603A可用于各種同位素標記和其他任何非同位素標記，但需自備標記底物；BTN90603B和BTN90603C可分別用于生物素和地高xīn標記，不需自備標記底物。

試劑盒組成：

成分	規格
2×A型標記反應液(自備標記物型)	50μl(僅A型有)
2×B型標記反應液(生物素型)	50μl(僅B型有)
2×C型標記反應液(DIG型)	50μl(僅C型有)
dATP,2mM	10μL(僅A型有)
dTTP,2mM	10μL(僅A型有)
dGTP,2mM	10μL(僅A型有)
dCTP,2mM	10μL(僅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超純水	1ml
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干凈的硅化的塑料離心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×標記反應液(ABC三種之一)	10μl
超純水	補水到15μl

注意：非同位素標記物由于疏水性強，容易與常用的塑料離心管表面非特異性結合，所以一定要使用硅化的塑料離心管。模板DNA并非越多越好，因為模板會在雜交反應中跟標記的探針雜交，競爭性地抑制探針跟靶分子的雜交。
2. 沸水浴5-10分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5-10分鐘使DNA模版充分變性，立即放冰上待用。注意：如果PCR儀器不能設置到100℃，99℃加熱5分鐘也可。
3.高速離心數秒使所有液體集中在管底，根據試劑盒類型加入下列成份：

試劑盒類型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，濃度均為2mM) 自備的2mM dTTP/標記dUTP混合物(見注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水

注：上表中的dTTP/標記dUTP混合物中dTTP和標記的dUTP的總濃度為2mM(在20μL體系中混合液的終濃度為0.1mM，dTTP與生物素或DIG標記的dUTP的比例zuì好為65:35)。由于空間阻礙，并非標記生物素或DIG標記的dUTP越多靈敏度越高，一般dTTP與標記dUTP的比例在65：35為zuì佳。但如果使用自備的其他標記核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl標記的dUTP，則用戶需要自己摸索其與dTTP之間的zuì佳比例，如果使用32P標記的dUTP，則比活zuì好為3000Ci/mmol，濃度為好為10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 輕柔吹打混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數秒使所有液體集中在管底。
5. 37℃保溫1-20小時。標記效率跟模版量和保溫時間相關，具體見下表：

模版DNA用量	1小時后探針合成量	20小時后探針合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自備的0.5M EDTA(pH8.0)終止反應，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加熱100℃ 5分鐘使DNA探針變性成單鏈，然后直接加入到雜交反應液中即可。如果電泳檢測，標記產物將是彌散狀態。
 注意：本方法標記核苷酸摻入率高，因此可以不經純化直接使用。如果需要純化，注意不要用酚抽提法純化非同位素(生物素、DIG和其他等)標記的DNA探針，因為這些標記分子疏水性強，能使標記的DNA進入疏水的有機相而丟失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另購非同位素探針柱式純化試劑盒)。對比活高的同位素探針，由于其其不穩定，因此應該立即使用，不要長久放置。

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貨號	名稱	規格
BTN90604A	PCR法DNA探針標記試劑盒	5次
BTN100921	地高xīn標記dUTP溶液(Digoxin-11-dUTP)	25μL
BTN100809	SSPE溶液，20×	250mL
BTN130906	超級雜交液(原位雜交)	10mL
BTN100604	鮭魚精DNA溶液	1mL
YT358	細胞內鈣離子熒光探針(Fura-2 AM)	50微升
KFS157	線粒體綠色熒光探針(tracker Green)	50μg

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