酵母核提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品僅用于生物化學(xué)研究方面，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多酵母核提取試劑盒等亞細胞結(jié)構(gòu)研究產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括酵母核提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：酵母核提取試劑盒
英文名稱：Yeast nuclear extraction kit
產(chǎn)品貨號：HR8198
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T

酵母核提取試劑盒適用于從各種酵母中提取完整的具有活性的細胞核。提取過程簡單方便。制備的酵母核純度高，保持天然活性，少交叉污染。
我公司可以提供針對動物細胞、組織、植物、真菌、酵母、微生物、液體、土壤等不同樣本的蛋白提取試劑盒，包含用于非雙向電泳和雙向電泳等不同下游應(yīng)用的試劑盒以及含去垢劑成分和不含去污劑成分的蛋白提取試劑盒，專用于蛋白質(zhì)譜檢測的試劑盒等總計300多種蛋白提取試劑盒可供選擇。我公司還可以提供針對動物、植物等不同樣本的細胞核、線粒體、溶酶體、葉綠體等不同細胞器的提取試劑盒。

儲存條件：2-8℃保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前請仔細閱讀產(chǎn)品說明書 ※ ※ ※
使用限制：本試劑僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。
產(chǎn)品更新：我公司會更新或升級產(chǎn)品，以優(yōu)化和增強其使用性能，產(chǎn)品說明書會進行相應(yīng)的版本更新。使用產(chǎn)品時，請參照隨產(chǎn)品附帶的說明書，不要參照網(wǎng)上下載的說明書，可能是不同的版本。需要zuì新電子版說明書時可以在收到產(chǎn)品后發(fā)郵件索取。
使用安全：使用時需要合適的實驗室外套，一次性手套。避免皮膚或粘膜與試劑接觸。如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
儀器：
●離心機● 振蕩器● 渦旋混勻器● 移液器●冰箱●冰盒
試劑：
● PBS (pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液(1×))(phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
耗材：
●離心管● 吸頭

使用方法：

使用注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
●蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
●可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

1．酵母培養(yǎng)物，在4℃，1000g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集酵母沉淀。
2．用PBS 洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】：
●在1000g離心5分鐘。
3．每100μl酵母沉淀物中加入200μl酵母核蛋白提取液A，混勻后，在30℃條件下保溫15分鐘。
4．在1000g條件下離心5-10分鐘，棄上清，收集酵母沉淀。
5．用500μlPBS 洗滌酵母一次，離心收集菌體。
【注】：
●在1000g離心5分鐘。
6．酵母沉淀物中加入300-500μl酵母蛋白提取液B，充分混勻。
【注】：
● 根據(jù)酵母細胞量調(diào)整提取液用量，一般加菌體體積的2-5倍均可。
● 按酵母菌體體積每100μl或100mg 濕重菌體加入300-500μl提取液。
7．在37℃或室溫條件下輕微振蕩45-60分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
8．在1000g條件下離心5-10分鐘，收集沉淀，棄上清。
9．用500μl PBS洗滌沉淀。離心收集沉淀。
【注】：
●在1000g，離心10分鐘。
10．沉淀中加入400μl 酵母核提取液C，高速渦旋15秒混勻，然后在振蕩器上振蕩15-30分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
11．再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，1000g條件下離心10分鐘，棄上清，沉淀即為酵母細胞核。
12．用適量試劑D重懸酵母核，置4℃保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br /> 【注】：
● 也可根據(jù)需要用其他緩沖液保存。

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名稱：植物葉綠體純化試劑盒
貨號：BTN120308
規(guī)格：15次
葉綠體是重要的，負責(zé)植物光合作用的細胞器，很多重要的特性(如雄性不育)也跟葉綠體相關(guān)，所以葉綠體是研究植物生理和母系遺傳的重要材料。對植物葉綠體進行生化，遺傳和分子生物學(xué)研究都需要進行葉綠體純化。本產(chǎn)品就是基于密度梯度離心的，專門用于從植物葉片中純化完整葉綠體的試劑盒。

產(chǎn)品特點：
1．即用型試劑盒，用戶不需要單獨配制各種溶液。
2．提供AB兩種選擇，A型用于葉綠體粗提，所得葉綠體含少量其他細胞器污染，可用于后續(xù)的SDS-PAGE，Western，ELSIA和蛋白組分析。B型用于葉綠體精提，所得葉綠體完整，可用于后續(xù)的光合作用，電子鏈和磷酸化，跨膜轉(zhuǎn)運，體外葉綠體蛋白合成，蛋白定位等研究。還可用于的葉綠體膜，基質(zhì)，類囊體，葉綠體DNA和葉綠體RNA純化。
3．本產(chǎn)品足夠15次提取，每次可處理30g葉片，能得到5mg左右葉綠體。
4．已經(jīng)成功用于菠菜，大豆，萵筍，白菜，煙草和甜菜等植物，還可用于更多植物(可能需要優(yōu)化條件)。


試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A成分一	250ml×2
溶液A成分二(干粉)	3g
溶液B	60ml
帶柄尼龍濾膜	1個
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：葉綠體對溫度高度敏感，所以整個操作必須在冰上或者在冷室進行，所用器皿和溶液均需要在4℃預(yù)冷。離心時一定要在4℃進行，離心力以g而不是rpm計算。如果需要研究葉綠體的功能，提取過程還需要在昏暗的光線條件下進行。

1．實驗前1-2天將植物放在暗室培養(yǎng)以減少葉綠體中淀粉顆粒的形成，否則離心時這些顆粒很容易使葉綠體破裂。葉片在實驗前需先用自來水洗凈，再用蒸餾水淋洗，去掉多余水分。如果葉片采集后不能立即處理，則保存時需要保持葉片濕潤，即使如此，葉片的放置時間也不能超過一天。
2．新鮮(實驗當(dāng)天)制備溶液A：將自備的去離子水與溶液A成分一按4：1的比例混合，然后在混合液中加入溶液A成分二干粉到終濃度0.1%(每100mL中加入0.1g干粉)，搖晃溶解后所得溶液即為溶液A，冰上預(yù)冷待用。一次實驗(從30 g葉片提取葉綠體)所需要的溶液A體積跟材料不同而不同。
3．新鮮采集植物葉片，快速去除葉脈并將葉片剪成1-3cm2大小的碎片并浸泡在適量的預(yù)冷的溶液A中(每克葉片加4mL溶液A，但對煙草和大豆，每克葉片需要加6mL溶液A)。
4．將浸泡了葉片的溶液A轉(zhuǎn)移到Waring勻漿機(即家用制備果汁的勻漿機)中，低速勻漿10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入勻漿機底部后，再低速勻漿10秒。注意：除Waring勻漿機外，還可以選擇Dounce玻璃勻漿器，Polytron勻漿機和研磨(加玻璃珠)等裂解細胞的方法，但這些方法的單次處理量都比較小，需要將樣品分成很多小份單獨勻漿，然后再匯集。
5．用帶柄尼龍濾膜過濾勻漿液，可先將濾液收集到預(yù)冷的200mL量筒中，再等分到4個預(yù)冷的50mL的塑料離心管中(每個管中的濾液不要超過35mL)。帶柄尼龍濾膜后可反復(fù)使用。
6．在水平轉(zhuǎn)子離心機上4℃ 200g離心3分鐘(對菠菜，白菜和萵筍材料)或400g離心1分鐘(對甜菜材料)，白色沉淀為未破裂的細胞或細胞核。
7．將上清液(含葉綠體)轉(zhuǎn)移到一個新的、預(yù)冷的50mL塑料離心管中。
8．在水平轉(zhuǎn)子離心機上4℃ 1000g離心7分鐘，小心棄上清，沉淀含葉綠體，呈淺綠色。
9．在沉淀中加入1.5mL預(yù)冷的溶液A，手彈離心管底部使葉綠體重懸。注意：重懸時zuì好避免溶液起泡，也不要用槍頭吹打，否則葉綠體容易破裂。沉淀下有白色淀粉屬于正常現(xiàn)象，但重懸葉綠體時避免將白色淀粉重懸。
10．將4管葉綠體重懸液匯集(共約6mL)。此溶液為葉綠體粗提產(chǎn)物，可直接用于后續(xù)的SDS-PAGE，Western，ELISA和蛋白組分析。如果需要以之為材料精提葉綠體，就需要將破裂的葉綠體和完整的葉綠體分開，根據(jù)植物的不同，可選用下述兩種密度梯度離心法之一進行分離。
11．單濃度分離法(適合菠菜，白菜和萵筍等材料)：
a)在50mL塑料離心管中先加入6mL溶液A成分一和4mL溶液B，充分混合均勻。
b)在其液面上小心鋪上第11步匯集得到的約6mL葉綠體重懸液。
c)在水平轉(zhuǎn)子離心機上4℃ 1000g離心8分鐘，zuì上層的綠色帶含破碎的葉綠體，線粒體和核糖體等，管底的綠色沉淀為完整的葉綠體。
d)小心將上清倒出后，在葉綠體沉淀中加入預(yù)冷的0.5mL溶液A成分一，手指輕彈管底使之重懸。
e)將葉綠體重懸液轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中并避光保存。可在相差顯微鏡下檢查葉綠體完整性。葉綠體必須盡快使用，否則非常容易失去活性。
12．雙濃度分離法(適合煙草，甜菜和大豆等材料)：
a)在14mL塑料離心管中先加入0.5mL溶液A和2mL溶液B，充分混合均勻，得密度梯度重液。
b)在另一試管中將3mL溶液A和2mL溶液B充分混合均勻，得密度梯度輕液。
c)將密度梯度輕液小心鋪在密度梯度重液之上，然后將第10步匯集得到的葉綠體重懸液中的4mL(還剩下2mL)小心鋪在密度梯度輕液之上。
d)在水平轉(zhuǎn)子離心機上4℃ 3200g離心15分鐘，zuì上層綠色帶含破碎的葉綠體、線粒體和核糖體等，重液和輕液間的綠色帶為完整葉綠體。
e)用廣口吸管小心將重液和輕液之間的綠色帶(葉綠體)轉(zhuǎn)移到新的離心管中，加入三倍體積的預(yù)冷的溶液A成分一，輕柔混勻。
f)在水平轉(zhuǎn)子離心機上4℃ 1700g離心1分鐘，小心將上清倒出后，在綠色的葉綠體沉淀中加入預(yù)冷的0.5mL溶液A成分一，手指輕彈管底使之葉綠體重懸。
g)將葉綠體重懸液轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中并避光保存，也可在相差顯微鏡下檢查葉綠體完整性。葉綠體必須盡快使用，否則非常容易失去活性。所得精提葉綠體可用于后續(xù)的光合作用，電子鏈和磷酸化，跨膜轉(zhuǎn)運，體外葉綠體蛋白合成，蛋白定位等研究。還可用于的葉綠體膜，基質(zhì)，類囊體，葉綠體DNA和葉綠體RNA純化。

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