HR0055-50T 植物總蛋白提取試劑盒
- 產品/服務：HR0055-50T 植物總蛋白提取試劑盒
- 型 號：HR0055-50T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-31
- 有效期至：長期有效
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本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應用兼容。...
產品特點：
● 使用方便,從細胞,組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
● 提取過程簡單方便,將蛋白提取的時間縮短至1小時。
● 含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
● 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
● 總蛋白提取液含多種有效成分,可充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可結合釋出的蛋白防止沉淀。
● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6 種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 離心機 ● 振蕩器 ● 勻漿機/勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS緩沖液 ● 蛋白定量試劑盒
使用注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
使用方法：
1、提取液準備：
每500μL冷的提取液A 中加入4μL蛋白穩定劑和2μL蛋白酶抑制劑,混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。
2、取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的100-200mg鮮嫩植物組織樣本用手術剪刀盡可能剪碎,加入500μL提取液A后用勻漿機/勻漿器充分勻漿。
【注】：
● 也可置于研缽中用液氮研磨,研磨后加入500μL冷的提取液 A。
● 沒有液氮研磨條件,也可加入500μL提取液A 直接置冰上研磨。
3、將勻漿液吸入一個預冷的干凈離心管中在4℃振蕩30分鐘-1小時。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉速,提取液能輕微晃動即可。
● 無振蕩條件也可不振蕩,靜置1h,中間每隔10min用移液器吹打混勻一次。
● 有些黏液較多的樣本可能難以吸取,可以將吸頭剪掉一點再吸。
4、在4℃,12000×g條件下離心10-15分鐘。
5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管,即可得到植物總蛋白。
6、上述蛋白提取物請分裝后于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
【注】：
● 建議用BCA法進行蛋白定量。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒問題。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被細菌污染。
常見問題分析：
● 蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全,導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
● 用什么方法定量蛋白？
建議用BCA 法。不適合用Bradford 法,因為試劑A 中含有干擾Bradford 法的組份,導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford 法定量。
● 提取時出現膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產物中有時會出現少量透明膠狀物,屬正?，F象。該透明膠狀物為含有基因組DNA 等的復合物。不檢測和基因組DNA 結合特別緊密的特定蛋白的情況下,可以直接離心取上清進行后續實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的核蛋白,則可以通過超聲處理,300w/10 秒間隔10 秒,超聲3 分鐘,隨后離心取上清用于后續實驗。
● 提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結構,沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構象和活性。
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