HR0119-50 高脂肪樣本蛋白提取試劑盒
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HR0119-50 高脂肪樣本蛋白提取試劑盒
- 型 號：HR0119-50
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：897
高脂肪樣本蛋白提取試劑盒適用于從各種脂肪含量高的細(xì)胞和實(shí)體組織，如脂肪細(xì)胞、脂肪肝細(xì)胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結(jié)締組織、胸腺組織等動物組織中提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。...
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 移液器 ● 離心機(jī) ● 渦旋混勻器 ● 振蕩器 ● PBS
注意事項(xiàng)：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
● 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
● Western 實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用beta-actin、GAPDH、TubμLin。
使用方法：
細(xì)胞蛋白提?。?/b>
1、提取液制備：
每500μL冷的蛋白提取液中加入2μL 蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
● 蛋白樣品用于測定某些細(xì)胞內(nèi)蛋白酶、磷酸酶活性等下游實(shí)驗(yàn)時(shí)，注意根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整抑制劑混合物是否加入。
2、取5-10×106個(gè)細(xì)胞，在4℃，2000×g條件離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
3、用冷 PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4、每 5×106個(gè)細(xì)胞中加入500μL冷的蛋白提取液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
【注】：
● 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微晃動即可。
● 沒有振蕩條件可以不振蕩，置4℃靜置即可，稍微延長時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
5、套上液體收集管，將提取液吸入蛋白離心管中，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。
【注】：
● 蛋白離心管適用于過濾除去不溶性大顆粒組織固體雜質(zhì)，固態(tài)脂肪等，如果是做脂肪含量低的細(xì)胞或無明顯固體不溶物時(shí)，可以不使用離心柱，直接將勻漿液離心即可。
● 提取液液面有脂滴時(shí)，可以用移液器小心吸除脂滴即可。
● 蛋白液里的微量脂肪需要直接過濾除去，可以使用我們的蛋白去脂肪柱。
● 離心前蛋白液會在重力作用下自然流穿離心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。
6、將液體收集管中的液體吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到蛋白樣品。
7、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
【注】：
● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。
組織蛋白提?。?/b>
1、提取液制備：
每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
2、取100mg-200mg組織樣本剪碎，加入500μL蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機(jī)充分勻漿。
【注】：
● 如果組織樣品很細(xì)小，可剪碎后直接加入提取液振蕩15分鐘，可以不用勻漿器。
● 也可用液氮研磨的方法，常用操作即可。
3、將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩15-30分鐘。
【注】：
● 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微晃動即可。
● 沒有振蕩條件可以不振蕩，置4℃靜置即可，稍微延長時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
4、套上液體收集管，將提取液吸入蛋白離心管中，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。
【注】：
● 蛋白離心管適用于過濾除去不溶性大顆粒組織固體雜質(zhì)，固態(tài)脂肪等，如果是做脂肪含量低的細(xì)胞或無明顯固體不溶物時(shí)，可以不使用離心柱，直接將勻漿液離心即可。
● 提取液液面有脂滴時(shí)，可以用移液器小心吸除脂滴即可。
● 蛋白液里的微量脂肪需要直接過濾除去，可以使用我們的蛋白去脂肪柱。
● 離心前蛋白液會在重力作用下自然流穿離心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。
5、將液體收集管中的液體吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。
6、將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到蛋白樣品。
7、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
【注】：
● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。
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