HR9099-50T 絲狀真菌核蛋白提取試劑盒
- 產品/服務：HR9099-50T 絲狀真菌核蛋白提取試劑盒
- 型 號：HR9099-50T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
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本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，需要除鹽后再用于2D電泳。如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒（HR0165）。...
產品特點：
● 使用方便。
● 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6 種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 離心機 ● 振蕩器 ● Dounce勻漿機/勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒
注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
● 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
● 下游實驗如果是進行特定蛋白酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。
● 離心機轉速有相對離心力(RCF,×g)和每分鐘轉速(RPM)兩種表示方式,有些離心機設置有RPM和×g顯示切換,但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算：
G=r×1.118×10-5×rpm(r為有效離心半徑,即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度,單位為厘米)例如：轉速為3000rpm，有效離心半徑為10cm，則相對離心力(RCF，×g)為=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
使用方法：
1、提取液準備：
每200μL提取液B中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。
2、取100-200mg絲狀真菌樣本用PBS洗滌干凈。
3、加入500μL-1mL提取液A，用組織勻漿機/勻漿器充分勻漿。
4、勻漿液在2-8℃振蕩30分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。
5、將提取液在4℃下1000×g離心5分鐘，棄上清，留沉淀。
6、在沉淀中加入200μL冷的提取液B，高速渦旋振蕩5秒。
7、在2-8℃振蕩40分鐘-1小時。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。
8、在4℃，12000-14000×g條件下離心10分鐘。
9、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。
10、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
【注】：
● 建議用BCA法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。
常見問題分析：
● 蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A試劑B的處理時間即可。
最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
● 用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
● 提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。
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