HR0257-50T 酵母線粒體提取試劑盒
- 產(chǎn)品/服務：HR0257-50T 酵母線粒體提取試劑盒
- 型 號：HR0257-50T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
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線粒體是真核細胞中產(chǎn)生能量的重要細胞器。細胞中的能源物質(zhì)—脂肪、糖、部分氨基酸在此進行最終的氧化,并通過偶聯(lián)磷酸化生成ATP,供給細胞生理活動之需。對線粒體結(jié)構(gòu)與功能的研究通常是在離體的線粒體上進行的。本產(chǎn)品提供全套試劑,適用于從各種酵母樣品中提取線粒體。提取過程簡單方便。...
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 離心機 ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● PBS緩沖液
使用注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
使用方法：
1、酵母培養(yǎng)物,在4℃,1000×g條件下離心5-10分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集酵母沉淀。
2、用PBS洗滌酵母兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】：
● 在1000×g離心5分鐘。
3、每100μL體積或100mg濕重酵母沉淀物中加入400μL酵母線粒體提取液A,混勻后,在30℃條件下保溫15 分鐘。
【注】：
● 酵母數(shù)量根據(jù)實驗情況調(diào)整,每次的裂解液用量并不是一定的,請根據(jù)實際情況調(diào)整。
4、在1000×g條件下離心5-10分鐘,收集酵母沉淀。
5、用300μL酵母洗滌液D洗滌酵母一次,離心收集酵母。
6、酵母沉淀物中加入500μL酵母線粒體提取液B,充分混勻。
【注】：
● 根據(jù)酵母細胞量調(diào)整提取液用量,一般加菌體體積的2-5倍均可。
● 按酵母菌體體積每100μL或100mg濕重菌體加入250-500μL提取液。
7、在37℃或室溫條件下輕微振蕩60-90分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速,提取液能輕微晃動即可。
● 如果沒有振蕩條件也可以不振蕩,稍微延長提取液的處理時間,中間每隔10分鐘用移液器吹打混勻。
● 不用酵母樣本需要的時間差異較大,根據(jù)下游細胞裂解的難易程度調(diào)整,如果下游試劑C處理后沉淀沒有明顯減少,需要延長此步驟處理時間。可以延長至2小時。
8、在2000×g條件下離心5-10分鐘,棄上清,收集沉淀。
9、沉淀用300μL酵母洗滌液D洗滌兩次。離心收集沉淀。
10、在沉淀中加入400μL酵母線粒體提取液C,充分混勻,然后在振蕩器上振蕩10-30分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速,保持提取液能輕微晃動即可。
● 如果沒有振蕩器的話,在4℃靜置,稍微延長處理時間,中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
● 試劑C處理后沉淀應減少,否則延長處理時間。
11、在4℃,500×g條件下離心5分鐘。棄沉淀,收集上清。
12、將上清吸入另一干凈離心管。
13、在4℃,12000×g以上條件下離心20分鐘。棄上清,收集沉淀。
14、在沉淀中加入400μL線粒體保存液E,混勻。
15、在4℃,12000×g條件下離心20分鐘,棄上清,收集沉淀。即得到酵母線粒體樣品。
16、根據(jù)下游實驗需要,將沉淀用相應的緩沖液重懸。置冰箱備用或直接用于下游實驗。
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