在許多細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)、純化及蛋白-蛋白互作等免疫實(shí)驗(yàn)（如WB、IP、Co-IP、ChIP）中，細(xì)胞裂解是關(guān)鍵一步。

基本介紹

根據(jù)不同細(xì)胞類型、蛋白定位及下游應(yīng)用，需要不同的細(xì)胞裂解液進(jìn)行細(xì)胞裂解及蛋白提取（表1）。

表1 根據(jù)不同蛋白定位選擇裂解液

蛋白定位              裂解液

全細(xì)胞NP-40、         RIPA

細(xì)胞質(zhì)（可溶性蛋白）   Tris-HCl

細(xì)胞質(zhì)（細(xì)胞骨架等不溶性蛋白）Tris-Triton

細(xì)胞膜                NP-40、RIPA

細(xì)胞核                RIPA

線粒體                RIPA

差異化比較

RIPA裂解液

RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液，獲得的蛋白樣品可用于常規(guī)WB、IP等實(shí)驗(yàn)。

組分：25 mM Tris-HCl, pH 7.6、150 mM NaCl、1% NP-40、1%去氧膽酸鈉、0.1%十二烷基硫酸鈉（SDS）。

IP裂解液

IP裂解液是一種改良后的RIPA裂解液，具中等強(qiáng)度效力，可高效溶解細(xì)胞蛋白，但不會(huì)像RIPA一樣釋放染色體組DNA或破壞蛋白復(fù)合物。適合下游免疫沉淀或親和吸附應(yīng)用。

組分：25 mM Tris-HCl, pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、1% mM EDTA、5% 甘油。

NP-40裂解液

NP-40裂解液是一種很溫和的非離子型去垢劑，與蛋白結(jié)合力強(qiáng)，尤其適用于膜蛋白非變性條件下的溶解。

組分：50mM Tris-HCl pH 8.0、150mM氯化鈉、1％NP-40；加蛋白酶抑制劑：抑肽酶、亮肽素、胃抑素，每種1μg / ml；使用前立即添加1mM PMSF。

Tris-Triton裂解液

Tris-Triton裂解液是非離子型表面活性劑，效力介于NP-40和SDS之間，下游應(yīng)用有WB、ELISA、IP。

組分：10mM 三羥甲基氨基甲烷(Tris)，pH值7.4、100mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1% Triton X-100、10% 甘油、0.1% SDS、0.5% 去氧膽酸鈉。