標簽：凝膠遷移實驗 古朵生物 凝膠電泳

  古朵帶您了解凝膠遷移實驗常見問題?

  凝膠遷移實驗常見問題

  1、為什么看不到遷移帶?

  1)蛋白樣本提取質量不高，蛋白降解或者提取量不足。

  2)樣本中沒有可以與探針結合的蛋白。

  3)探針與蛋白無特異性的相互作用。

  4)轉膜效率低，蛋白或者探針未轉移到膜上。

  5)曝光或者成像時間過短。

  在Super-Shift EMSA測定中看不到Super-Shift DNA/蛋白復合物帶還可能有以下原因：

  6)抗體沒有工作。不是所有的抗體都可以用于Super-Shift EMSA，只有對非變性蛋白的表面抗原決定簇起反應的抗體才能夠用于Super-Shift EMSA。

  7)測定的活化的DNA/蛋白復合物中沒有希望檢測的構成成分存在。此時既看不到Super-Shift的帶，也看不到DNA/蛋白復合物的量的減少

  8)使用的抗體過度稀釋。一般10-20ul的反應液需要使用0.5-1ul原倍的抗體。

  9)多抗與DNA/蛋白復合物形成大的聚集物而不進膠。在這種情況下，雖然看不到Super-Shift的帶，但應當可以看到DAN/蛋白復合物的電泳帶明顯減少。

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