古朵技術：抗體的制備方法與原理

  抗血清的制備

  有了質量好的抗原，還必須選擇適當的免疫途徑，才能產生質量好(特異性強和效價高)的抗體。

  (一)用于免疫的動物

  作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量，如一般制備抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因動物反應良好，而且能夠提供足夠數量的血清，用于免疫的動物應適齡，健壯，無感染性疾患，-好為///雄性，此外還需十分注意動物的飼養，以消除動物的個體差異以及在免疫過程中死亡的影響。若用兔，-好用純種新西蘭兔，一組三只，兔的體重以2～3kg為宜。

  (二)免疫途徑

  免疫途徑有多種多樣，如靜脈內、腹腔內、肌肉內、皮內、皮下、淋巴結內注射等，一般常用皮下或背部多點皮內注射，每點注射0.1ml左右。途徑的選擇決定于抗原的生物學特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物學活性抗原，一般不宜采用靜脈注射。

  (三)佐劑

  由于不同個體對同一抗原的反應性不同，而且不同抗原產生免疫反應的能力也有強有弱，因此常常在注射抗原的同時，加入能增強抗原的抗原性物質，以刺激機體產生較強的免疫反應，這種物質稱為免疫佐劑。

  佐劑除了延長抗原在體內的存留時間，增加抗原刺激作用外，主要的是，它能刺激網狀內皮系統，使參與免疫反應的免疫活性細胞增多，促進T細胞與B細胞的相互作用，從而增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的產生。

  常用的佐劑是福氏佐劑(Freund adjuvant),其成分通常是羊毛脂1份、石臘油5份，羊毛脂與石臘油的比例，視需要可調整為1：2～9(V/V)，這是不*福氏佐劑，在每毫升不*佐劑加入1～20mg卡介苗就成為*佐劑。

  配制方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保存備用。免疫前取等容積*或不*佐劑與免疫原溶液混合，用振蕩器混勻成乳狀，也可以在免疫前取需要量佐劑置乳缽中研磨，均勻后再邊磨邊滴加入等容積抗原液(其中加卡介苗3～4mg/ml或不加)，加完后再繼續研磨成乳劑，滴于冰水上5～10min內*不擴散為止。為避免損失抗原，亦可用一注射器裝抗原液，另一注射器裝佐劑，二者以聚乙烯塑料管連接，然后二者來回反復抽吸，約數十分鐘后即能*乳化。檢查合格后即以其中一注射器作注射用。

  (四)免疫方法

  抗原劑量，*劑量為300～500μg，加強免疫的劑量約為*劑量為1/4左右。每2～3周加強免疫一次。加強免疫時用不*佐劑，*免疫時皮下注射百日咳疫苗0.5ml，加強免疫時不必注射百日咳疫苗。

  在第2次加強免疫后2周，從耳緣靜脈取2～3ml血，制備血清，檢測抗體效價(見后)。如未達到預期效價，需再進行加強免疫，直到滿意時為止(圖2-3)。當抗體效價達到預期水平時，即可放血制備抗血清。

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