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大鼠弓形蟲IgG抗體 Elisa試劑盒說明書

發布時間:2023-08-31瀏覽次數:905返回列表

  大鼠弓形蟲IgG抗體 Elisa試劑盒說明書


  本產品僅供研究使用

  【試劑盒名稱】

  大鼠弓形蟲IgG抗體定量檢測試劑盒(ELISA)

  【試劑盒用途】

  定量檢測大鼠血清、血漿及相關液體樣本中弓形蟲IgG抗體的含量。

  【檢測原理】

  本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被大鼠弓形蟲IgG抗原透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成,顏色的深淺與樣品中大鼠弓形蟲IgG抗體濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本中大鼠弓形蟲IgG抗體含量。

  【試劑盒組成】

  1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標試劑 6ml×1 瓶

  3 酶標包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶

  5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶

  7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標準品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

  9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份

  11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個

  【操作步驟】

  1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。

  2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

  3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。

  4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

  5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

  6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。

  7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

  8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

  9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。

  10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉)。

  11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

  12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。

  【樣本要求】

  1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

  2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

  3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。

  【注意事項】

  1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

  2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

  3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。

  4、牢記樣本已經稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。

  5、本試劑盒定量范圍為0.5-16U/L,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(0.5-16U/L范圍內),乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度。

  6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。

  7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。

  8、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。

  9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

  【操作程序總結】

  準備試劑,樣品和標準品

  加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘

  洗板4次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘

  洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

  加入終止液

  15分鐘之內讀OD值

  計算

  【檢測范圍】

  0.5U/L - 16U/L

  【規格】

  96人份/盒

  【貯藏】

  2-8℃,避光防潮保存。

  【有效期】

  6個月

  上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。

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