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古朵快訊:人真皮成纖維細胞的分離培養制備方式
發布時間:2023-11-06瀏覽次數:761返回列表
人真皮成纖維細胞的分離培養制備方式
真皮成纖維細胞屬于由中胚層分化而來的間質細胞。細胞來源于人正常的皮膚組織,真皮成纖維細胞是一種貼壁培養方式的細胞,由于這些細胞非常容易培養,它們已經被廣泛用于細胞和分子生物學研究中。
一般而言,成纖維細胞能夠分泌I型和III型膠原等細胞外基質,并且研究表明不同器官中的成纖維細胞有顯著的不同。傷口修復時,真皮成纖維細胞由可增殖,可遷移的表型變為有收縮性的,可重塑基質的表型,同時,它們會分泌大量的透明質酸來應對修復時的炎癥反應。
以下是提供的一種人真皮成纖維細胞的制備方式(僅供參考):
1.首先在分離真皮成纖維細胞時要做到在無菌條件下進行,打開生物安全柜紫外燈30min作無菌處理。
2.將手術廢棄的皮膚組織浸泡75%酒精,消毒2min,
3.將皮膚組織置含P/S的PBS中清洗至少3遍,
4.然后用眼科剪除去脂肪及結締組織等,
5.將皮膚剪成0.5*0.5 cm小塊,放入dish中,加0.1%的dispase溶液,封口膜封口,4℃冰箱過夜消化,
6.第二天,用鑷子將表皮與真皮分開(薄的那層是表皮,厚的那層是真皮),
7.將真皮剪碎,移至離心管,用0.1%膠原Ⅰ型酶+0.1%膠原Ⅱ型酶+0.1%膠原Ⅳ型酶+ 37℃水浴鍋中消化至少2 h(視消化程度而定),
8.用100 μm網篩過濾,
9.取濾液,300 g,離心5 min,
10.用完全培養基重懸沉淀,
11.鋪瓶,
12.隔天換液。
以上是皮膚成纖維細胞分離培養的一種方式,不同的技術人員分離培養的方法也不同,使用的試劑比例也不盡相同,皮膚成纖維細胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達檢測,采用細胞免疫熒光技術。細胞純度可高達于90%,所有的細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。古朵試劑盒