抗體實驗原理及鑒定
發布時間：2023-10-30瀏覽次數：816返回列表
抗體實驗原理 :
1、特異性結合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞，通常需要補體或吞噬細胞等共同發揮效應以清除病原微生物或導致病理損傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結合，直接發揮中和病毒的作用。
2、活補體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經典途徑激活補體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。
3、結合細胞：不同類別的免疫球蛋白，可結合不同種的細胞，參與免疫應答。
4、可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動
免疫。免疫球蛋白A（IgA）可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
5、具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質，也具有刺機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
6、抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質，均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經透析法將其純化。
抗體的鑒定：
1）抗體的效價鑒定：鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應,瓊脂擴散試驗,酶聯免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
2）抗體的特異性鑒定：抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質的識別能力。抗體的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結合率,求出各自在IC50時的濃度,并按公式計算交叉反應率。
3）真核翻譯起始因子2C2抗體的親和力：是指抗體和抗原結合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,抗體分子的結合位點與抗原決定簇之間立體構型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復合物穩定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側鏈相反電荷基因的庫侖力,范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數K表示,K的單位是L/mol。
