HCP檢測試劑盒,解決宿主細胞蛋白殘留檢測難題
發(fā)布時間：2019-10-18瀏覽次數(shù)：1641返回列表
細胞蛋白殘留中，你遇到過哪些問題呢？HCP檢測試劑盒,解決宿主細胞蛋白殘留檢測！
什么是HCP？
宿主細胞蛋白(host cellprotein, HCP) 是指生物制品中來自生產(chǎn)細胞系的宿主細胞的蛋白成分, 既包括宿主細胞的結(jié)構(gòu)蛋白也包括宿主細胞(傳代細胞)分泌的促生長因子等。HCP具有潛在的安全風險, 作為生物制品中的非目標成分，HCP可能引發(fā)機體未知的免疫應(yīng)答而影響生物制品的功效，甚至引起超敏反應(yīng)或其他不良反應(yīng)。因此，建立合適的HCP檢測方法，有助于生物制品的質(zhì)量控制，提高生物制品的使用安全性。
所有生物制劑的工藝開發(fā)的都必須經(jīng)過HCP檢測，并證明已在純化過程中將它們降低到安全水平，一般要求每mg藥物HCP應(yīng)當控制在ng范圍內(nèi)。
《中華人民共和國藥典》2010年版第三部明確規(guī)定，CHO細胞殘余蛋白占總蛋白含量要小于0.05%以下才符合規(guī)定；美國FDA規(guī)定，用一種靈敏度較高的方法檢測藥品中的HCP，其含量應(yīng)該低于檢測限（通常小于100ppm）。
ELISA是目前應(yīng)用廣泛的HCP檢測方法，該方法操作相對簡單、精度良好，方便設(shè)定控制范圍和建立技術(shù)規(guī)范，中華人民共和國藥典2010年版三部中的HCP檢測均要求采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定。
HCP ELISA的原理
HCP ELISA的原理是先將HCP抗體包被酶標板，孵育待測樣品，通過HCP抗體捕獲和富集樣品中HCP，再加入與包被酶標板的抗體種屬不同的，酶聯(lián)報告基團的HCP抗體，結(jié)合已被富集的HCP，通過底物顯色或熒光的方式成像，終定量計算HCP的含量。
典型針對HCP的夾心ELISA實驗
在藥物研發(fā)中，通常會建立通用和專屬的HCP ELISA方法。前期可以采用通用HCP ELISA試劑盒。到臨床實驗時，藥企會采用專屬試劑盒，即工藝特異HCP ELISA試劑盒，需要單獨純化HCP蛋白，免疫篩選抗體。
為什么要定制HCP檢測試劑盒？
目前生物制品行業(yè)多以商業(yè)化的通用型HCP ELISA試劑盒來檢測產(chǎn)品中的宿主蛋白殘留。但宿主細胞的分泌型蛋白和部分死亡細胞釋放的結(jié)構(gòu)蛋白成分復雜，不同的工藝，加上相關(guān)基因產(chǎn)物需要經(jīng)過獨特的翻譯后修飾，這些都導致不同生物制品中HCP的成分和比例有較大差異。使用通用型的HCP ELISA試劑盒，通常會缺乏特異性的評估，會帶來漏檢和檢測結(jié)果批間差過大的風險，從而對生物制品質(zhì)量安全帶來風險。
只有根據(jù)不同的生產(chǎn)工藝，制備工藝特異的細胞蛋白標準品和特異的抗血清，建立相應(yīng)的檢測方法，才能更真實反應(yīng)供試品的細胞蛋白殘留量。
建立特異性HCP檢測方法費時且研發(fā)成本較高，但是研發(fā)成功后，可以獲得長期安全有效的保障；如果從大量使用角度考慮，成本也遠低于商業(yè)化的通用型ELISA試劑盒。
特別是對于藥企來說，藥物研發(fā)周期很長，成功率也很低，投入和產(chǎn)出不是直接劃等號的，在藥品研發(fā)的中后期，藥企也會非常關(guān)注生產(chǎn)工藝設(shè)計過程中HCP的控制。因為，藥物中HCP殘留量會影響臨床試驗效果。
HCP檢測試劑盒制備流程
空載體轉(zhuǎn)化宿主細胞，培養(yǎng)空載細胞系；
按正常生產(chǎn)流程純化空載細胞系培養(yǎng)物，可以省去后幾個步驟，以便盡可能保留HCP成分；
用HCP免疫合適的動物宿主，例如兔，山羊，綿羊或雞，通過級聯(lián)免疫（Cascade Immunization），大大提高抗體對微量蛋白質(zhì)檢測的敏感性；
提取宿主產(chǎn)生的抗體，通過2D凝膠電泳/ Western印跡檢查抗原的覆蓋率；
篩選佳抗體及抗體組合；
配制夾心ELISA試劑盒。
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