產(chǎn)品名稱：四色多重免疫熒光試劑盒（三標四色）?，免疫熒光(immunofluorescence，IF)，通常是指用熒光標記的抗體示蹤或檢查樣品中相應抗原的方法。根據(jù)抗原抗體反應，將不影響抗原抗體相互作用的熒光分子標記在抗體上，與其相應的抗原反應后，在熒光顯微鏡下針對熒光標記分子的激發(fā)光發(fā)射光進行觀察，從而檢測目的指標的相...

產(chǎn)品名稱：四色多重免疫熒光試劑盒（三標四色）
試劑盒組成：488熒光染料(綠光)(即用型，5mL),-20℃；CY3熒光染料（紅光）(即用型，5mL)，-20℃；TSA+增強劑，100ul，-20℃（可選）；
高敏多聚hrp山羊抗兔二抗（5mL）4℃。
備注：488熒光染料、CY3熒光染料在-20度下，均為固體，使用之前需解凍。


TSA+增強劑使用方法：TSA+增強劑能夠進一步增強熒光信號放大液的放大信號5-10倍，TSA+增強劑：熒光放大液=1:500，使用TSA+增強劑不是必須的選項，可以根據(jù)具體的情況選擇添加
或者不選擇添加。
操作流程：
1、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ。取出放在通風廚內(nèi)，酒精晾干后放入自來水中稍洗，蒸餾水洗。
2、抗原修復：組織切片置于盛滿PH9.0EDTA堿性抗原修復液或者PH6.0檸檬酸修復緩沖液的修復盒中于微波爐內(nèi)進行抗原修復（也可以用高壓1-2min100度水煮15min95度水浴20min等其他熱修復方法）。中火8min，停火8min，轉(zhuǎn)中低火7min，此過程中應防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。(修復液和修復條件根據(jù)組織類型以及抗原類型來確定）。
3、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：切片放入3%過氧化氫溶液，室溫避光孵育15min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
4、BSA封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴加用3%BSA-PBS（或者其他封閉液）均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。
5、加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加用抗體稀釋液稀釋好的的一抗X，切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過夜或者37度1-2h。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）
6、加hrp二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應種屬的hrp二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min，PBS洗三次。
7、熒光染料反應：488熒光染料（或者CY3熒光染料）反應10-15min，PBS洗三次。
8、重復2-7步驟（換用另外一種熒光染料）
9、DAPI復染細胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。
10、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
11、鏡檢拍照：切片于熒光顯微鏡/共聚焦/多通道熒光掃描儀/多光譜成像系統(tǒng)下觀察并采集圖像。

染料	激發(fā)波長	發(fā)射波長
DAPI藍色	350	420
480	450	480
488綠色	480-490	512-520
CY3紅色	530-550	570-590
520綠色	490	520
570紅色	550	570
620	590	620
690	630	690
780	750	780

產(chǎn)品名稱：四色多重免疫熒光試劑盒（三標四色）


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