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價(jià)格：電議
所在地：湖北 黃石市
型號：生化因子試劑盒
更新時(shí)間：2018-11-06
瀏覽次數(shù)：837
公司地址：湖北省黃石市黃石港區(qū)磁湖路41號
陳國珠(女士)
【主要組成成分】
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組分 |
48T規(guī)格 |
96T規(guī)格 |
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標(biāo)準(zhǔn)品 |
1 vial |
2 vial |
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預(yù)包被酶標(biāo)板 |
96T |
48T |
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檢測抗體 |
1 vial |
1 vial |
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標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
5 ml |
5 ml |
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HRP標(biāo)記的鏈霉親和素 |
1vial |
1vial |
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10×檢測緩沖液 |
5 ml |
5 ml |
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顯色底物 TMB |
10 ml |
10 ml |
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終止液 |
10 ml |
10 ml |
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20×濃縮洗滌液 |
30mL |
30mL |
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說明書 |
1份 |
1份 |
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自封袋 |
1個(gè) |
1個(gè) |
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封板膜 |
3片 |
3片 |
需要但未提供的材料及耗材
1、能夠檢測 450 nm 吸光度的酶標(biāo)儀，參考波長 570 nm 或 630 nm。
2、移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水或去離子水
4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、1L量筒
7、無粉一次性乳膠手套
8、稀釋用聚丙烯試管
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個(gè)月。
2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開封后，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體，有效期為28天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動(dòng)的酶標(biāo)儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細(xì)胞培養(yǎng)上清：4000rpm條件下離心20min，去除細(xì)胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。
2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。
3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個(gè)月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時(shí)在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。
【試劑準(zhǔn)備】
檢測前請將所有的試劑、樣本恢復(fù)至室溫。
如果濃縮的試劑出現(xiàn)結(jié)晶，37℃溫浴，直至結(jié)晶全部溶解。
1×洗液
吸取 20×濃縮洗液 50 ml 至 1 L 的量筒，加蒸餾水或去離子水至 1000 ml，輕輕混勻，避免泡沫。
轉(zhuǎn)移至干凈瓶內(nèi)。2 - 25℃貯存，1×洗液可穩(wěn)定 30 天。
1×檢測緩沖液
吸取 10×濃縮檢測緩沖液 5 ml 至 100 ml 量筒，加蒸餾水或去離子水至 50 ml，輕輕混勻，避免泡沫。
2 - 8℃貯存，1×檢測緩沖液可穩(wěn)定保存 30 天。
檢測抗體
稀釋前充分混勻。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本的數(shù)量，用 1×檢測緩沖液按 1：100 稀釋濃縮的檢測抗體。
注意：請?jiān)?b> 30 分鐘內(nèi)使用稀釋后的檢測抗體。
辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素
稀釋前充分混勻。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本的數(shù)量，用 1×檢測緩沖液按 1：100 稀釋濃縮的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。
注意：請?jiān)?b> 30 分鐘內(nèi)使用稀釋后的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。
樣本稀釋
如果樣本需要稀釋，請用試劑盒提供的 1×檢測緩沖液稀釋血清/血漿樣本，用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞培養(yǎng)上清
人轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1）標(biāo)準(zhǔn)品
用蒸餾水或去離子水重溶人轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1）標(biāo)準(zhǔn)品，重溶體積標(biāo)注在人轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1） 標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)簽上。輕柔地渦旋震蕩，確保充分混勻，重溶后標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為 1000 pg/ml。重溶后靜置 10 - 30 分鐘。稀釋前充分混勻。
請使用聚丙烯管進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品稀釋。
血清/血漿樣本標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：
取 200μl 濃縮的人轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1）標(biāo)準(zhǔn)品，加入 200 μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的高濃度 (500 pg/ml)。在每一個(gè)試管中加入200 μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。使用高濃度標(biāo)準(zhǔn)品做 1：1 系列稀釋。每次移液時(shí)，請確保充分混勻。以標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零濃度。
細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：
取200μl濃縮的人轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1）標(biāo)準(zhǔn)品，加入 200 μl 細(xì)胞培養(yǎng)基，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的高濃度 (500 pg/ml)。在每一個(gè)試管中加入 200 μl 細(xì)胞培養(yǎng)基。使用高濃度標(biāo)準(zhǔn)品做 1：1 系列稀釋。每次移液時(shí)，確保充分混勻。以細(xì)胞培養(yǎng)基作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零濃度。
1000 pg/ml
【操作程序】
1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法配置好，并建議做復(fù)孔。
2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
3.加入 350 μl 1×洗液靜置浸泡25 秒。為了獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果浸泡是必須的。棄掉洗液之后， 在吸水紙上將微孔板拍干。洗板完成之后，請立即使用微孔板，不要讓微孔板干燥。
4.每孔加入 50 μl 1×檢測緩沖液。
5.復(fù)孔加入 50 μl 2 倍倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔復(fù)孔加入 50 μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。樣本孔加入 50 μl樣本。
6.每孔加入 50 μl 稀釋的檢測抗體。保證步驟 4、5、6 連續(xù)加樣，不要間斷。加樣過程在 10 分鐘內(nèi)完成。
7.使用封板膜封板。300 轉(zhuǎn)/分鐘振蕩，室溫孵育 2 小時(shí)。
8.棄掉液體，每孔加入 350 μl 洗液洗板，洗滌 5 次。每次洗板，在吸水紙上拍干。為獲得理想的實(shí)驗(yàn)性能，必須徹底移除殘留液體。
9.每孔加入 100 μl 稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。
10.使用新的封板膜封板。300 轉(zhuǎn)/分鐘振蕩，室溫孵育 45 分鐘。
11.重復(fù)步驟 8。
12.每孔加入 100 μl 顯色底物 TMB，避光，室溫孵育 5 - 30 分鐘。
13.每孔加入 100 μl 終止液。顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果顏色呈現(xiàn)綠色或者顏色的變化明顯不均勻，請輕輕叩擊板框，充分混勻。
14.在 15分鐘之內(nèi)，使用酶標(biāo)儀進(jìn)行雙波長檢測，測定 450 nm 大吸收波長和 570 nm 或 630 nm 參考波長下的 OD 值。校準(zhǔn)后的 OD 值為 450 nm 的測定值減去 570 nm 或 630 nm 的測定值。僅使用 450 nm 測定會(huì)導(dǎo)致 OD 值偏高，并且準(zhǔn)確度降低
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的平均 OD 值，然后減去零濃度標(biāo)準(zhǔn)品的 OD 值。
檢測完成后，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的吸光度（OD值）作為橫坐標(biāo)，利用計(jì)算機(jī)軟件，回歸分析確定佳擬合曲線，創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計(jì)算樣品的濃度值。
如果樣品被稀釋，通過上述方法測的的濃度值，要乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的終濃度
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線高濃度，請用檢測緩沖液稀釋樣本，并重新檢測。如果細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本需要較大的稀釋倍數(shù)，請用細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行適度稀釋。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會(huì)干擾檢測結(jié)果，檢測前，請排除該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。
2、劑量反應(yīng)曲線線性
校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9900。
3、度
批內(nèi)度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個(gè)板塊內(nèi)精度評估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%。
批間度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于15%。
4、靈敏度
低檢出劑量小于3.2pg/ml。
5、回收率
三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行五次回收率評估，回收率在85%-115%之間。
6、特異性
本試劑盒識別天然和重組人轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1），與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。
穩(wěn)定性
2℃-8℃保存，有效期6個(gè)月。
【注意事項(xiàng)】
生物安全
1、檢測必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。
2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套，實(shí)驗(yàn)完成后徹底洗手。
4、試劑盒中的終止液為酸性溶液，在使用終止液時(shí)，請佩戴防護(hù)服，及防護(hù)眼睛、手及面部的設(shè)施。
5、本試劑盒用于科學(xué)研究，不能用于診斷治療。
6、請不要使用其他批號或其他來源的試劑替代本試劑盒中的試劑。
技術(shù)要點(diǎn)
1、重溶或者混合蛋白溶液時(shí)，避免起泡。
2、加標(biāo)準(zhǔn)品與樣本時(shí)，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。
3、合適的溫育時(shí)間，和充分的洗滌步驟，是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。
4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{(lán)色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍(lán)色底物產(chǎn)物，會(huì)瞬間變?yōu)辄S色。
6、實(shí)驗(yàn)中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴(yán)格按照說明書標(biāo)明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作。
免責(zé)聲明：以上所展示的[生化因子試劑盒 人轉(zhuǎn)化生長因子β1定量檢測試劑盒]信息由會(huì)員[黃石市藍(lán)圖生物科技有限公司]自行提供，內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由發(fā)布會(huì)員負(fù)責(zé)。
