本產品提供全套試劑，適用于從各種酵母樣品中提取總核糖體。提取過程簡單方便。本試劑盒不能用于冷凍樣品的核糖體提取。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業的生物試劑銷售公司。公司主要經營血清、抗原、抗體等生物試劑產品，可以為您提供專業的技術服務，以優良的價格、優質的服務、優先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內多家企業、單位建立了良好的長期合作關系，擁有較好的企業信譽和品牌形象。 主營產品:血清、抗體、抗原、核酸提取、核酸純化等生化試劑

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 勻漿機/Dounce勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 如果是做核酸類下游應用，實驗中所有液體以及器具均應該用DEPC處理。用0.1%的DEPC處理12小時然后高壓。

● 下游用于蛋白質類實驗的話可以不用DEPC 處理。

● 細胞最好采用新鮮收集的，或者收集后立即置于-80℃保存的樣本。

● 最好使用標準Dounce勻漿器勻漿，如果沒有標準Dounce勻漿器，用普通玻璃勻漿器勻漿也可，但是核糖體回收率可能會下降。

使用方法：

1、酵母培養物，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集酵母沉淀。

2、用PBS洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

【注】：

● 在1000×g離心5分鐘。

3、每100μL體積或100mg濕重酵母沉淀物中加入400μL酵母核糖體提取液A，混勻后，在30℃條件下保溫15分鐘。

【注】：

● 酵母數量根據實驗情況調整，每次的裂解液用量并不是一定的，請根據實際情況調整。

4、在1000×g條件下離心5-10分鐘，收集酵母沉淀。

5、用300μL酵母洗滌液D重懸細胞，靜置10分鐘，離心收集酵母。

6、酵母沉淀物中加入500μL酵母核糖體提取液B，充分混勻。

【注】：

● 根據酵母細胞量調整提取液用量，一般加菌體體積的2-5倍均可。

● 按酵母菌體體積每100μL或100mg濕重菌體加入250-500μL提取液。

7、在37℃或室溫條件下輕微振蕩60-90分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔10分鐘用移液器吹打混勻。

● 不同酵母樣本需要的時間差異較大，根據下游細胞裂解的難易程度調整，如果下游試劑C處理后沉淀沒有明顯減少，需要延長此步驟處理時間。可以延長至2小時。

8、在2000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，收集沉淀。

9、沉淀用300μL酵母洗滌液D洗滌兩次。離心收集沉淀。

10、在沉淀中加入400μL酵母核糖體提取液C，充分混勻，用Dounce勻漿器勻漿20-30下。

【注】：

● 標準Dounce勻漿器用緊杵5-8次，松杵勻漿15-20次。

● 勻漿杵一個上下來回為一次。

● 普通玻璃勻漿器勻漿一般也不超過30次，勻漿次數并非越多越好。

● 如沒有勻漿器，可在加入試劑C后在振蕩器上振蕩10-30分鐘。用振蕩器/搖床的較低轉速，保持提取液有輕微晃動即可。沒有振蕩器的話，在4℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

● 試劑C 處理后沉淀應減少，否則振蕩延長處理時間。

11、將勻漿液在4℃，1000×g力條件下離心5分鐘。棄沉淀，收集上清。

12、將上清在4℃，3000×g力條件下離心10分鐘，棄沉淀，收集上清。

13、將上清在4℃，12000×g-20000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。

14、在上清中加入100μL試劑E，充分混勻。

15、置2-8℃冰箱靜置過夜。

【注】：

● 靜置保存時間不少于10小時。

16、在4℃條件下，10000×g離心20-45分鐘。

17、小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

● 盡可能吸干上清。

● 吸取時小心，防止吸掉沉淀。

18、沉淀用適量核糖體保存液或其他相應的緩沖液重懸。即得到酵母核糖體樣品。

【注】：

● 也可不用盒中的核糖體保存液重懸，根據實驗需要選擇合適的緩沖液重懸核糖體或直接用于下游實驗。

19、置冰箱備用或直接用于下游實驗。

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